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专利号: 2019102424881
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的SSR引物,其特征在于选自如下引物对中的至少十对:CL-SSR1、CL-SSR2、CL-SSR6、CL-SSR7、CL-SSR8、CL-SSR10、CL-SSR11、CL-SSR17、CL-SSR19、CL-SSR20、CL-SSR21、CL-SSR24、CL-SSR27、CL-SSR29、CL-SSR33、CL-SSR35、CL-SSR37、CL-SSR38、CL-SSR42、CL-SSR45,其核苷酸序列如如SEQ ID NO.1~40所示。

2.一种用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的试剂盒,其特征在于包含权利要求1所述的用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的SSR引物。

3.根据权利要求2所述的用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的试剂盒,其特征在于还包含10×PCR反应缓冲液,2.5mM dNTP,5U/μL Taq DNA聚合酶,无菌超纯水。

4.权利要求1所述的用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的SSR引物或权利要求2~3任一项所述的用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的试剂盒在新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析中的应用。

5.一种新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的方法,其特征在于包含如下步骤:(1)提取待测样品的DNA;

(2)以步骤(1)提取的待测样品的DNA为模板,以上述用于新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的SSR引物为扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物进行丙烯酰胺凝胶电泳;

(3)采用常规方法对电泳结果进行遗传多样性和亲缘关系分析。

6.根据权利要求5所述的新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为:10×PCR反应缓冲液2.5μL,2.5mM dNTP 1μL,5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL,10μM上下游引物各0.5μL,DNA模板1μL,加无菌超纯水至25μL。

7.根据权利要求5所述的新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的PCR扩增的条件为:94℃变性5min,94℃变性30S,50~65℃退火30S,

72℃延伸30S,32个循环,72℃延伸5min。

8.根据权利要求5所述的新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的遗传多样性分析的具体操作为:

利用POPGENE32软件计算居群的表观等位基因数、有效等位基因数、基因多样性指数和Shannon信息指数。

9.根据权利要求5所述的新月弯孢菌遗传多样性和亲缘关系分析的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的亲缘关系分析的具体操作为:

利用NTSYSpc2.10软件计算各个待测样品之间遗传相似系数,并使用UPGMA法聚类构建系统发育树。