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专利号: 201910281613X
申请人: 长江大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组猪圆环病毒3型Cap蛋白,其特征在于,所述的重组猪圆环病毒3型Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种重组猪圆环病毒3型Cap蛋白的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1、重组猪圆环病毒3型Cap蛋白基因的克隆及目的基因的筛选:筛选得到基因序列如SEQ ID NO.2所示的PCV3野毒感染猪病料,经过DNA提取和PCR扩增构建得到PCV3 Cap蛋白基因克隆载体;

步骤2、重组猪圆环病毒3型Cap蛋白基因改造:设计剪切引物对,上游引物使得步骤1中的PCV3 Cap蛋白基因5’-端的58个氨基酸编码基因被剪切掉;下游引物使得在PCV3 Cap蛋白基因的3’端融合连接一段来自猪载脂蛋白E的C端氨基酸编码基因序列;其中,所述设计剪切引物对为:PCV3 Cap Nd58上游引物:其引物序列如SEQ ID NO.3所示,PCV3 Cap基因3’端融合连接Apo E 3’端15肽下游引物:其引物序列如SEQ ID NO.4所示;

步骤3、构建重组猪圆环病毒3型Cap蛋白表达质粒载体:以步骤1所得的PCV3 Cap蛋白基因PCR扩增产物为模板,用步骤2所得的剪切引物对进行扩增后,将扩增产物插入表达质粒载体pET28a的多克隆位点的BamH I/Hind III切点间,得到重组猪圆环病毒3型Cap蛋白表达质粒载体,该质粒载体的表达区的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示;

步骤4、构建重组猪圆环病毒3型Cap蛋白表达工程菌;

步骤5、重组猪圆环病毒3型Cap蛋白的诱导表达及纯化,得到该重组猪圆环病毒3型Cap蛋白。

3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤1中PCR扩增所用的引物如下:PCV3 Cap外套上游引物PF:核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示,PCV3 Cap外套下游引物PR:核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤5中具体为:将所述重组猪圆环病毒3型Cap蛋白表达工程菌在培养基中培养,并加入α-乳糖诱导表达后,收菌体,加PBS液后超声波裂解,然后用硫酸铵进行分级沉淀,再收集10%-30%饱和度的硫酸铵沉淀,用PBS液复溶后依次用凝胶柱层析、离子交换层析进行纯化。

5.一种猪圆环病毒3型Cap蛋白表达载体,其特征在于,所述表达载体的表达区的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

6.一种猪圆环病毒3型Cap蛋白表达工程菌,其特征在于,该工程菌包含权利要求5所述的猪圆环病毒3型Cap蛋白表达载体。

7.一种猪圆环病毒3型Cap蛋白的抗体的ELISA检测试剂盒,其特征在于,所述的ELISA检测试剂盒包括:(A)包被有权利要求1所述的重组猪圆环病毒3型Cap蛋白的ELISA酶标板;

(B)标准阴性血清:PCV3抗体阴性的猪血清;

(C)标准阳性血清:PCV3抗体阳性的猪血清;

(D)辣根过氧化物酶标记的酶标二抗:抗猪IgG抗体;

(E)样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、抗体稀释液、显色液和终止液。

8.如权利要求7所述的猪圆环病毒3型Cap蛋白的抗体的ELISA检测试剂盒,其特征在于,重组猪圆环病毒3型Cap蛋白的包被浓度为10μg/ml。

9.权利要求7所述的ELISA检测试剂盒在制备兽医临床产品中的应用,其特征在于,所述兽医临床产品包括PCV3疫苗免疫猪的血清中抗PCV3 Cap蛋白抗体的检测产品。