1.一种分子印迹比率荧光探针的制备方法,其特征在于它按以下步骤制备的:一、制备碳量子点:将百香果皮和尿素加入高纯水中,然后置于微波消解罐中,启动微波消解仪,反应时间设定为25min~35min,温度设定为180℃~220℃,反应完成后用一次性注射器和微孔过滤膜过滤,得到碳量子点溶液,将碳量子点溶液在温度为40℃~70℃下旋转蒸发除去溶剂,然后在温度为50℃~70℃下真空干燥20h~30h,得到碳量子点固体产物;
步骤一中所述的尿素与百香果皮的质量比为1:(5~7);步骤一中所述的百香果皮与高纯水的质量比为1:(10~20);
二、制备介孔分子印迹聚合物:将土霉素放入容器中,再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵,室温条件下磁力搅拌混合20min~30min,然后加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L~2.5mol/L的氢氧化钠水溶液,室温条件下磁力搅拌反应20h~
30h,得到带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物,将带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物放在索氏提取装置中,加入索氏提取液,在温度为60℃~70℃下提取22h~
26h,得到索氏提取产物,将索氏提取产物洗至中性,得到介孔分子印迹聚合物;步骤二中所述的高纯水的体积与土霉素的质量比为1mL:(3~5)mg;步骤二中所述的土霉素与十六烷基三甲基溴化铵的质量比为1:(1~2);步骤二中所述的土霉素的质量与3‑氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为1g:(2~3)mL;步骤二中所述的土霉素的质量与正硅酸乙酯的体积比为1g:(8~12)mL;步骤二中所述的土霉素的质量与浓度为1.5mol/L~2.5mol/L的氢氧化钠水溶液的体积比为1g:(1~3)mL;步骤二中带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物的质量与索氏提取液的体积比为1g:(70~120)mL;步骤二中所述的索氏提取液由乙醇和浓度为
1.5mol/L~2.0mol/L的盐酸水溶液混合而成,且索氏提取液中浓度为1.5mol/L~2.0mol/L的盐酸水溶液与乙醇的体积比为1:(9~19);
三、制备分子印迹比率荧光探针:将碳量子点固体产物加入高纯水中,得到浓度为1mg/mL~2mg/mL的碳量子点溶液,然后将浓度为15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液、浓度为1mg/mL~2mg/mL的碳量子点溶液、浓度为5mmol/L~15mmol/L的5'‑鸟苷酸二钠溶液、介孔分子印迹聚合物、乙醇和3‑氨丙基三乙氧基硅烷加入到容器中,在室温条件下磁力搅拌避光反应20h~30h,得到反应溶液,反应溶液在转速为5000rpm~7000rpm条件下离心
5min~10min,得到固体产物,用高纯水洗涤固体产物2~4次,然后在温度为50℃~70℃下进行真空干燥10h~15h,即得到分子印迹比率荧光探针;步骤三中所述的浓度为1mg/mL~
2mg/mL的碳量子点溶液和浓度为15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(3~5);步骤三中所述的浓度为5mmol/L~15mmol/L的5'‑鸟苷酸二钠溶液与浓度为
15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(15~25);步骤三中所述的介孔分子印迹聚合物的质量与浓度为15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1g:(10~20)mL;步骤三中所述的乙醇和浓度为15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(10~20);步骤三中所述的3‑氨丙基三乙氧基硅烷和浓度为15mmol/L~25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(25~35)。
2.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法,其特征在于步骤一中所述微孔过滤膜的孔径为0.22μm。
3.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法,其特征在于步骤二中将土霉素放入容器中,再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵,室温条件下以搅拌速度为200rpm~300rpm磁力搅拌混合20min~30min。
4.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法,其特征在于步骤二中加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L~2.5mol/L的氢氧化钠水溶液,室温条件下以搅拌速度为200rpm~300rpm磁力搅拌反应20h~30h。
5.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法,其特征在于步骤三中在室温条件下以搅拌速度为200rpm~300rpm磁力搅拌避光反应20h~30h。
6.利用权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针检测土霉素的方法,其特征在于它按以下步骤完成的:
一、制备分散液:将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中,得到分散液;步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:(3~10)mL;分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L;
二、确定猝灭常数Ksv:①、将分散液与土霉素水溶液按体积比1:1混合均匀,土霉素水溶液中土霉素的浓度为Q1,且0.2μmol/L≤Q1,得到试验组溶液,利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测试验组溶液,得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs1和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu1;②、按照土霉素水溶液中土霉素浓度递增形式重复步骤二①操作n‑1次,第n次操作时,土霉素水溶液中土霉素浓度为Qn,Qn≤2.0μmol/L,利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测浓度为Qn试验组溶液,得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsn和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEun;③、依据Stern‑Volmer方程为F1/F2=Ksv[Q]+b,公式中F1为发射波长为620nm的铕的荧光强度,F1=FEu1~FEun,F2为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度,F2=FCQDs1~FCQDsn,Q为土霉素水溶液中土霉素的浓度,Q=Q1~Qn,Ksv为猝灭常数,b为常数,根据Q=Q1~Qn,F1=FEu1~FEun和F2=FCQDs1~FCQDsn,计算得到猝灭常数Ksv的值;
三、检测待测样品:①、对待测样品中土霉素进行初步测量,当待测样品中土霉素含量>2.0μmol/L时,将待测样品进行稀释,至待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L,且≥0.2μmol/L,然后将稀释后待测样品与分散液按体积比1:1混合均匀,得到待测组溶液;当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L时,将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀,得到待测组溶液;②、利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液,得到发射波长为
457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsu和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEuu,依据Stern‑Volmer方程为FEuu/FCQDsu=Ksv[Qu]+b,公式中FEuu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度,FCQDsu为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度,Ksv为猝灭常数,b为常数,Qu为待测样品或稀释后待测样品中土霉素的浓度,根据步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv,及检测得到的FEuu和FCQDsu,当待测样品中土霉素含量>2.0μmol/L时,依据稀释比例,按Stern‑Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu,当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L,且≥0.2μmol/L时,按Stern‑Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu;当待测样品中土霉素含量≤
0.2μmol/L,且≥0.057μmol/L时,定性分析待测样品含有土霉素。