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专利号: 2019103580942
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、样本准备:番茄澳粉208自交系为实验样本;

S2、试剂准备:

脱落酸(ABA):a,0μM浓度的ABA;b,10μM浓度的ABA;c,100μM浓度的ABA;d,1000μM浓度的ABA;

甲二氢愈创木酸(NDGA):e,0μM浓度的NDGA;f,10μM浓度的NDGA;g,100μM浓度的NDGA;

h,1000μM浓度的NDGA;将以上试剂分别放入备用器皿中,方便后续使用;

S3、试剂使用后对正常花粉的百分率检测

(1)选取小孢子时期的花蕾,使用注射器取药液用针头轻轻掰开萼片,将药液注入花药处;

(2)将花蕾立即放入FAA固定液,真空抽气20-30Min,固定24h后进行石蜡切片制作;

(3)经FAA固定液固定的样品,经叔丁醇梯度脱水之后,包埋在石蜡中,在轮转切片机上进行切片,然后将切片放在干净的载玻片上,加去离子水浮片,之后放在烘箱中进行烘片;

(4)样品烘片后,在二甲苯中去蜡,然后经梯度乙醇复水后,在海氏苏木精染液中染色;

(5)再经梯度乙醇脱水后,经1%固绿复染,经二甲苯透明之后用加拿大树胶封片观察,使用显微镜来统计正常花粉的百分率。

2.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于:所述步骤S3中步骤1处取多组样品,分别在处理之后的第2天、4天、6天及8天取样。

3.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于:所述轮转切片机对样品进行切片,切片厚度为8-10μM。

4.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于:所述观察和统计花粉百分率时,在OLYMPUS BX41光学显微镜下观察,并用OLYMPUS C-7070 Wide ZooM拍照,照片用Adobe Photoshop CS5软件进行处理编辑。

5.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于:所述样品烘干的温度为43℃,同时需要进行24h的烘干过程。

6.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法,其特征在于:所述步骤S3中步骤5统计正常花粉百分率时,经苏木精和固绿染色后,在显微镜下观察花粉,会很清楚的观察到有的花粉空瘪、透明、畸形为异常的花粉,有的花粉饱满、规则、不透光为正常花粉,以此统计正常花粉的百分率可初步判断花粉的质量,正常花粉的百分率越高的花粉其质量相对越高。