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专利号: 2019103669250
申请人: 杭州鑫富科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种L-泛解酸内酯脱氢酶,其特征在于,所述L-泛解酸内酯脱氢酶来源于Nocardia cyriacigeorgica,其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

2.分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸是编码权利要求1所述的L-泛解酸内酯脱氢酶的多核苷酸。

3.如权利要求2所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸的核苷酸序列选自下组:(3a)SEQ ID No:1所示的核苷酸序列;(3b)与(3a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

4.一种载体,其特征在于,所述载体含有权利要求2所述的多核苷酸。

5.一种重组细胞,其特征在于,所述重组细胞含有权利要求4所述的载体或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。

6.权利要求1所述的L-泛解酸内酯脱氢酶在催化L-泛解酸内酯生成D-泛解酸内酯中的应用。

7.一种多酶重组细胞,其特征在于,所述多酶重组细胞诱导产生权利要求1所述L-泛解酸内酯脱氢酶和D-酮基泛解酸内酯还原酶。

8.如权利要求7所述的多酶重组细胞,其特征在于,所述D-酮基泛解酸内酯还原酶来源于酿酒酵母,其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

9.如权利要求8所述的多酶重组细胞,其特征在于,编码所述D-酮基泛解酸内酯还原酶的多核苷酸序列选自下组:(9a)SEQ ID No:3所示的核苷酸序列;(9b)与(9a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

10.如权利要求7所述的多酶重组细胞,其特征在于,所述多酶重组细胞还诱导产生葡萄糖脱氢酶。

11.如权利要求10所述的多酶重组细胞,其特征在于,所述葡萄糖脱氢酶来源于微小杆菌,其氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。

12.如权利要求11所述的多酶重组细胞,其特征在于,编码所述葡萄糖脱氢酶的多核苷酸序列选自下组:(12a)SEQ ID No:5所示的核苷酸序列;(12b)与(12a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

13.多酶重组细胞的构建方法,其特征在于,包括:

步骤一,将权利要求2所述的多核苷酸插入第一载体,得到第一重组载体;将权利要求9所述的多核苷酸插入第二载体,得到第二重组载体;以及步骤二,将所述第一重组载体和第二重组载体导入宿主细胞,得到多酶重组细胞。

14.如权利要求13所述的构建方法,其特征在于,所述步骤一中,将权利要求9和权利要求12中所述的多核苷酸分别插入第二载体,得到第二重组载体。

15.如权利要求13或14所述的构建方法,其特征在于,所述第一载体为pET-28b,所述第二载体为pACYCDuet-1,所述宿主细胞为E.coli BL21(DE3)。

16.一种制备D-泛解酸内酯的方法,其特征在于,利用多酶重组细胞诱导产生的L-泛解酸内酯脱氢酶和D-酮基泛解酸内酯还原酶催化L-泛解酸内酯生成D-泛解酸内酯。

17.如权利要求16所述的方法,其特征在于,所述多酶重组细胞还诱导产生葡萄糖脱氢+酶,以葡萄糖作为辅底物,利用所述葡萄糖脱氢酶连续催化反应体系中的NADP 转化为NADPH。

18.如权利要求16所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:从反应后的反应体系中分离出D-泛解酸内酯。