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专利号: 2019104338965
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种产乙酰氨基葡萄糖的重组谷氨酸棒杆菌,其特征在于,是敲除了N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱乙酰酶编码基因NagA和氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱氨酶编码基因NagB,并表达了来源于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的氨基葡萄糖‑6‑磷酸N‑乙酰基转移酶编码基因GNA1;所述氨基葡萄糖‑6‑磷酸N‑乙酰基转移酶编码基因如NCBI‑ Gene ID: 179437所示;N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱乙酰酶编码基因如NCBI‑GeneID: 1020593所示;氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱氨酶编码基因如NCBI‑GeneID: 1020592所示。

2.如权利要求1任一所述的重组谷氨酸棒杆菌,其特征在于,以谷氨酸棒状杆菌S9114为出发菌株。

3.如权利要求2所述的重组谷氨酸棒杆菌,其特征在于,所述氨基葡萄糖‑6‑磷酸N‑乙酰基转移酶编码基因通过表达载体pJYW‑4进行表达。

4.一种构建权利要求1‑3任一所述的重组谷氨酸棒杆菌的方法,其特征在于,具体方法如下:

1)构建N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱乙酰酶编码基因NagA和氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱氨酶编码基因NagB敲除框,通过同源重组将敲除框中的卡那霉素抗性基因kana代替谷氨酸棒杆菌基因组中的N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱乙酰酶编码基因NagA和氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱氨酶编码基因NagB;

2)克隆秀丽隐杆线虫的氨基葡萄糖‑6‑磷酸N‑乙酰基转移酶编码基因GNA1,连接到质粒pTYW‑4‑ceN上,在GNA1基因的3’非翻译区插入重复性回文序列基因的3’非翻译区插入重复性回文序列,重复性回文序列的的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示,构建重组质粒pTYW‑

4‑ceN‑REP;将重组质粒转化进已敲除N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱乙酰酶编码基因NagA和氨基葡萄糖‑6‑磷酸脱氨酶编码基因NagB的谷氨酸棒杆菌,得到产乙酰氨基葡萄糖的谷氨酸棒杆菌工程菌。

5.一种生产乙酰氨基葡萄糖的方法,其特征在于,应用了权利要求1‑3任一所述的重组谷氨酸棒杆菌进行发酵。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,是将28‑30℃,200‑220 rpm下培养16‑20 h的重组谷氨酸棒杆菌种子以5‑10%的接种量转入发酵培养基,于28‑30℃,200‑220 rpm条件下培养100‑120 h。

7.权利要求1‑3任一所述的重组谷氨酸棒杆菌在制药领域的应用。