1.一种基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：酶标板、辣椒碱标准品、酶标物、显色液、终止液、10×浓缩洗涤液、抗体工作液、样品稀释液和样品复溶液。

2.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶标板为已经用辣椒碱包被抗原制作好的酶标板，包被浓度为0.1µg/mL；

所述辣椒碱包被抗原制备过程为：

a、以香兰素胺盐酸盐作为半抗原，称取20mg于反应瓶中，加入 400μL DMF 溶解，称取 

11.4 11.6mg NHS 于反应瓶中，再加入 19.0 19.2 mg EDC盐酸盐，室温避光搅拌过夜；

~ ~

b、取上清活泼酯液，分别逐滴滴加到224mg BSA 溶液中反应，反应缓冲液为 0.05mol/L pH 9.6 的碳酸盐缓冲液；反应在磁力搅拌下室内温度避光进行 4h，从加样结束开始计时；

c、将反应液置透析袋内，于 0.01M pH 7.4的PBS中4℃搅拌透析，每8h更换一次透析液，共更换4次，透析结束后，即得到辣椒素人工偶联抗原，即辣椒碱包被抗原。

3.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述辣椒碱标准品的浓度依次为0，0.1ng/ mL，0.25 ng/ mL、0.5 ng/ mL、1ng/ mL、2ng/ mL、

5ng/mL、10ng/mL；

所述酶标物为HRP标记的羊抗鼠IgG，工作浓度为0.1μg/mL；

所述显色液为显色液A液和显色液B液；

所述终止液为2mol/L硫酸溶液；

所述10×浓缩洗涤液具体为添加了质量浓度为0.05%Tween-20的0.02mol/L PBS缓冲液，其pH为7.4。

4.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述抗体工作液为浓度0.6µg/mL的CGMCC No.14689的杂交瘤细胞株分泌所得抗体溶液。

5.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液配方为：500mL浓度为96％以上的甲醇中加按质量浓度计1％乙腈、49％的浓度为97％以上的氯仿、0.025％ Tween-20。

6.根据权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品复溶液配方为：950mL蒸馏水中加入按质量浓度计0.02％KCl、0.023％ 0.024％~KH2PO4、0.8％NaCl、0.362％~0.363％Na2HPO4、5％甲醇、0.025％Tween-20和0.02％PEG-

20000。

7.权利要求1所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒的检测方法，其特征是步骤如下：（1）洗涤工作液的制备：取10×浓缩洗涤液，按照1 份 10×浓缩洗涤液兑9份去离子水的比例配置1×洗涤工作液，用于对酶标板进行清洗；

（2）标准溶液的配置：采用辣椒碱标准品配置标准溶液，具体浓度如下：0，0.1ng/mL，

0.25ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL；在酶标板上按照上述浓度顺序加入标准溶液，50μL/孔，至少两个重复；

（3）标准曲线的绘制：

每孔加入50μL 0.6μg/mL抗体工作液，37℃温育30min后，取出并将孔内液体甩干，每孔依次加入步骤（1）中已配置好的1×洗涤工作液200μL，倒出液体，此后再重复洗涤2次，最后拍干；

每孔加入100μL的酶标物，酶标板装入袋中后再放入保温箱中保温30min，取出后将孔内液体甩干，每孔加入步骤（1）中已配置好的1×洗涤工作液200μL，倒出液体，此后再重复洗涤2次，最后拍干；

每孔加100μL显色液，暗处37℃反应15min；取出酶标板，每孔加100μL终止液，用酶标仪测定光密度值A450；以辣椒碱标准品浓度为X轴，百分吸光值为Y轴，绘制标准曲线；

（4）待测样品的准备：取待测样品进行前处理，配置得到待测样品；在酶标板上加入待测样品，50μL/孔，每个待测样品至少两个平行；

（5）测定：按照步骤（3）所述步骤对酶标板中的待测样品进行测定；

（6）计算：将样品吸光值代入标准曲线，得到相应的值A，即为待测样品中辣椒碱的浓度。

8.根据权利要求7所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于：步骤（2）中辣椒碱标准品采用标准品稀释液进行稀释配置；所述标准品稀释液配方按质量浓度计为：950mL蒸馏水中加入按质量浓度计为0.02％KCl、0.023％ 0.024％~KH2PO4、0.8％NaCl、0.362％ 0.363％Na2HPO4、5％甲醇和0.025％Tween-20。

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9.根据权利要求7所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于：步骤（4）中所述样品的检测前处理步骤如下：a、取1g样品加入5mL样品稀释液，用旋涡混合器2500r/min充分混匀5min；混合均匀后放入离心机，在5000r/min、5℃的条件下离心5min，离心结束后，取上层液相；

b、重复步骤a得到二次提取的上层液相，与第一次提取的上层液相合并；

c、取两根管，分别加入2mL上述合并液相，在50℃下用氮气吹干；

d、吹干后，在两根管中分别加入2mL样品复溶液复溶，得到样品溶液，进行检测；其中一根管作为平行对照。

10.根据权利要求7所述基于辣椒碱指标的地沟油酶联免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述显色液包括显色液A：配方为醋酸钠13.5g 13.8g,柠檬酸1.4g 1.6g，30%双~ ~氧水0.3mL，蒸馏水加至500mL；显色液B：配方为乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油

50mL，取0.15g TMB溶于3mL DMSO中，蒸馏水加至500mL；

使用时，按显色液A：显色液B质量比为5:1的比例配置显色液，注意现配现用。