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专利号: 201910494994X
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:总DNA提取;

S2:以线粒体12S rRNA基因的部分序列作为分子标记序列进行PCR扩增;

S3:PCR产物的回收纯化;

S4:测序;

其中,所述PCR扩增用分子标记引物包括正向引物和反向引物:所述正向引物序列为:5’‑GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC‑3’;

所述反向引物序列为:5’‑CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG‑3’其中,所述PCR扩增的反应体系中添加有四氢呋喃和柠檬酸铵;

所述鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法的判断标准为:测序可得,三色菖鲉的分子标记序列为SEQ ID NO.4所示,褐菖鲉的分子标记序列为SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述总DNA提取的材料来源为肌肉组织。

3. 根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述PCR扩增的反应体系为:ddH2O 10.5‑31.5μL,10×buffer 1.5‑4.5μL, dNTPs1.2‑3.6μL,Taq酶0.1‑0.27μL,DNA模板0.6‑1.8μL,分子标记引物各0.6‑1.8μL。

4.根据权利要求3所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述DNA模板的浓度为40‑80ng/μL。

5. 根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述PCR扩增程序为:94‑95℃预变性4‑5min,然后94‑95℃变性44‑46s,49‑52℃退火44‑46s,70‑

74℃延伸 44‑46s,进行33‑37个循环,最后70‑74℃延伸8‑12min。

6.根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述PCR产物的回收纯化采用玻璃奶法。

7.根据权利要求1所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法,其特征在于:所述测序方式为双向测序。