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专利号: 2019104950063
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)基因组DNA提取;

2)利用MseI和NlaIII酶切组合对基因组DNA进行双酶切;

3)连接反应;

4)PCR扩增;

5)回收序列片段和高通量测序;

6)数据分析筛选和挖掘基因位点;

所述MseI和NlaIII用3-甲氧基-4-羟基肉桂酸和山梨糖醇进行修饰。

2.根据权利要求1所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述1)步骤中基因组DNA提取的材料来源为褐菖鲉的肌肉组织。

3.根据权利要求1所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述2)步骤中基因组DNA双酶切的酶切体系为:1-2μL的MseI,1-2μL的NlaIII,1-

2μL的50-100ng/μL的DNA,2.5-5μL的10хCut SmartTMbuffer,14-44.5μL ddH2O。

4.根据权利要求3所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述酶切体系的反应条件为:36.5-37.5℃水浴1.8-2.2h,冷却至7-8℃保存。

5.根据权利要求1所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述4)步骤中PCR扩增反应体系为:4-6μL连接产物、10-15μL 10mM dNTP、0.5-

0.75μL DNA聚合酶、2-3μL 10μM引物P1、2-3μL 10μM引物P2和1.5-2.25μL ddH2O。

6.根据权利要求5所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述PCR扩增体系中添加有维生素C。

7.根据权利要求1或5或6所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述4)步骤中PCR扩增反应条件为:97-98℃下2-3min,接下来15-18个循环的97-98℃30-45s,65-67℃28-32s和70-72℃28-32s,然后70-72℃4-6min。

8.根据利要求1所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述5)步骤中序列片段利用凝胶电泳进行回收。

9.根据权利要求7所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述凝胶电泳回收的片段大小在100-350bp。

10.根据权利要求1所述的基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方法,其特征在于:所述6)步骤中高通量测序为双端测序。