1.一种高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株,其特征在于,所述重组酵母菌株为Snf1蛋白的SNF1基因被敲除的解脂耶氏酵母菌株,所述SNF1基因的序列如SEQ NO.1所示,所述重组酵母菌株的保藏编号为:CGMCC NO.17555,分类命名为:解脂耶罗维亚酵母Yarrowia lipolytica,保藏日期为:2019年04月11日,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路
1号院3号。
2.一种如权利要求1所述的高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株的构建方法,其特征在于,包括在解脂耶氏酵母全基因组中获得SNF1基因,SNF1基因的序列如SEQ NO.1所示,以解脂耶氏酵母基因组为模板,通过PCR反应分别扩增所述SNF1基因的上游、下游片段及解脂耶氏酵母菌筛选标记URA3片段,然后通过重叠延伸PCR方法,将SNF1基因的上游、下游片段连接在解脂耶氏酵母菌筛选标记URA3片段的上游和下游,构建得到SNF1基因敲除组件,所述SNF1基因敲除组件的序列为SEQ NO.5,再将所述SNF1基因敲除组件转入已筛选好的尿嘧啶缺陷型的解脂耶氏酵母菌株,经转化筛选得到SNF1基因被敲除的解脂耶氏酵母菌株,即为重组酵母菌株。
3.如权利要求2所述的高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述SNF1基因敲除组件的构建过程中,所述SNF1基因的上游序列为SEQ NO.2,所述SNF1基因的下游序列为SEQ NO.3;所述URA3序列为SEQ NO.4。
4.如权利要求2所述的高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述PCR反应中,扩增SNF1基因上游的引物为:SNF1-UR 5'-atggcgaccgaacacg-3',
SNF1-UR:5'-acagatactcgtcgaccctgcatatccgact-3',扩增SNF1基因下游的引物为:
SNF1-DF:5'-caggcctttgtcgactttgacggctgggagt-3',SNF1-DR:5'-ttacttctcactctccttct-3';
扩增URA3的引物为:
URA3-F:5'-agtcg gatatgcagg gtcgacgagt atctgt-3',URA3-R:5'-actccc agccgtcaaa gtcgacaaag gcctg-3'。
5.如权利要求2所述的高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述SNF1基因敲除组件通过乙酸锂转化法转入已筛选好的尿嘧啶缺陷型的解脂耶氏酵母菌株。
6.如权利要求2所述的高氮条件下发酵赤藓醇的重组酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述SNF1基因敲除组件通过电击转化法转入已筛选好的尿嘧啶缺陷型的解脂耶氏酵母菌株。
7.一种高氮条件下重组酵母菌株在发酵产生赤藓醇中的应用。
8.一种高氮条件下重组酵母菌株发酵产生赤藓醇的方法,包括如下步骤:
首先将重组酵母菌株,即SNF1基因被敲除的解脂耶氏酵母菌株,接种在YPD培养平板上,培养基为20.0g/L葡萄糖、20.0g/L蛋白胨、10.0g/L酵母粉和15.0g/L琼脂,在28℃培养3天长出单菌落;
然后将单菌落接种于YPD液体培养基中,28℃振荡培养至DO600=30,获得种子液,将种子液接入赤藓醇发酵培养基中,接种量10%,28℃振荡培养5天即得赤藓醇。
9.如权利要求8所述的高氮条件下重组酵母菌株发酵产生赤藓醇的方法,其特征在于,所述赤藓醇发酵培养基的组成为:甘油100g/L,硫酸铵12.5g/L,K2HPO4 0.23g/L,MgSO4
1.0g/L,酵母粉1.0g/L,氯化钠25.0g/L,以蒸馏水配制。