1.一种重金属铅离子的检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：A材料的制备与修饰，步骤如下：

步骤（1）称取FeCl3·6H2O，乙二醇充分溶解后，加入聚丙烯酸，尿素，去离子水，超声溶解，最后移入聚四氟乙烯内衬的钢质水热釜反应；

步骤（2）量取Fe3O4纳米材料，超声分散，磁力搅拌条件下，加入质量分数为25%氨水，再以5 30 µL/10min的频率加入正硅酸乙酯，室温反应；

~

步骤（3）将步骤（2）中溶液乙醇稀释，在磁力搅拌条件下，加入三氨丙基三乙氧基硅烷和质量分数为25%NH3·H2O，在室温下搅拌反应；

步骤（4）称取四氯金酸、柠檬酸三钠置于冰水浴中，加入现配现用的1 mg/mLNaBH4溶液反应；

步骤（5）称取ZnCl2、CdCl2·2.5H2O分别溶解于去离子水中，逐滴加入巯基丙酸，然后用NaOH溶液分别调节pH至8.5；加热回流搅，在ZnCl2溶液中加入Na2S·9H2O溶液，制备壳层前驱体溶液，在CdCl2·2.5H2O溶液中加入0. 05~0.3 gNaBH4和0. 05~0.3 g硒粉，在通入氮气的条件下，前驱体溶液在 100 ℃下水浴回流反应，当溶液颜色逐渐变为橙红色时，反应结束；在已合成的CdSe量子点溶液中快速注入壳层前驱体溶液，并加热回流，制备发射红绿色荧光的CdSe@ZnS 核壳结构量子点；

B比率荧光生物探针的构建，步骤如下：步骤（6）取氨基化磁珠，加入纳米金溶液，超声震荡，磁分离去除上清，加入柠檬酸缓冲溶液，加入SH‑DNA后孵育，再加入经EDC活化的修饰有巯基丙酸的红光CdSe@ZnS量子点孵育，制备得到红色荧光探针；

步骤（7）取经EDC活化的巯基丙酸绿光量子点，加入末端修饰氨基的DNA混合孵育，制备得到绿色荧光探针；

步骤（8）取红色荧光探针，再加入绿色荧光探针；调节溶液pH，水浴加热，孵育后，关闭水浴锅冷却至室温，探针构建完成；在紫外灯下溶液呈现红色荧光；

将样品提取液加入到检测重金属铅离子的比率荧光生物探针反应是指在室温下反应，其反应时间为0 10min，调节探针的pH分别至3.0，5.0，7.0，9.0，11.0，测定I540/I630的比~

值，计算样品中铅离子的浓度；

C检测样品茶叶的处理和铅离子检测标准曲线的制备如下：步骤C‑1.称取1g茶叶于瓷坩埚中移入马弗炉500℃±25℃灰化6 8h冷却，后加入~

2mLHCl，在电炉上加热至烧干，用0.5%的硝酸将灰分溶解，用滴管将试样洗入10mL或25mL的容量瓶中，定容至刻度；

步骤C‑2.采用上述方法制备的比率荧光生物探针分别用以下9个标准铅离子溶液处‑5 ‑4 ‑3 ‑3

理，摩尔浓度分别为a) 10  µg/mL；b) 10  µg/mL；c) 10  µg/mL；d) 3×10  µg/mL；e) 6‑3 ‑2 ‑2 ‑2

×10  µg/mL；f) 10  µg/mL；g) 3×10  µg/mL；h) 6×10  µg/mL；i) 0.1 µg/mL；在室温下，分别调节探针溶液pH为3，5，7，9，11，孵育时间0 600 s；比较在不同的铅离子浓度下，比~

率荧光强度I540/I630的变化；

所述步骤C‑1将样品提取液加入到检测金属铅的比率荧光生物探针中，控制环境的pH，以及反应时间，通过荧光分光光度计测定并计算I540/I630的比值；

所述步骤C‑2用检测金属铅离子的比率荧光生物探针检测铅离子样品溶液，并根据铅离子标准曲线进行计算，得到待测样品铅离子的含量或范围值；

所述步骤（1）具体为FeCl3·6H2O为0.81 g，乙二醇溶液为30 mL，聚丙烯酸为20 g ，去离子水500 µL和尿素1.80 g，搅拌充分溶解后，超声时间为10 分钟混合，加入聚四氟乙烯内衬的钢质水热釜的容积为50 mL的中，反应温度200 ℃，反应时间为10 16小时，然后冷却~

至室温；

所述步骤（2）具体为取步骤（1）中Fe3O4纳米材料为2 mL，超声分散，在转速为500 rpm条件下，加入0.5 0.95 mL、质量分数25%的氨水并搅拌5 10分钟，加入正硅酸乙酯的量为50‑~ ~

100 µL，正硅酸乙酯与水的体积比为1:1，加样量为10 20 µL/10min并在室温下不断搅拌反~

应10 16小时；

~

所述步骤（3）具体为取步骤（2）中溶液500 µL，无水乙醇定容5 mL，三氨丙基三乙氧基硅烷的量为8~20 µL，25%NH3·H2O为100~300 µL，在室温下搅拌反应10~16小时；

所述步骤（4）具体为20 50 mL、0.25 mM四氯金酸和6 7mg柠檬酸三钠置于冰水浴中，新~ ~

配置的0.1 M NaBH4为1~2 mL，反应时间15~30分钟；

所述步骤（5）具体为称取ZnCl2和CdCl2·2.5H2O为0. 1~0.2g 和0.3~0.6 g分别溶解于

100 mL去离子水中，巯基丙酸为0. 2 0.5 mL，分别用NaOH溶液调节pH至8.5；在100 ℃条件~

下加热回流搅拌15~60分钟，在ZnCl2溶液中加入Na2S·9H2O的量为0. 2~0.4 g，制备壳层前驱体溶液；在CdCl2·2.5H2O中加入 NaBH4和硒粉的量分别为0. 05~0.2 g和0. 1~0.2 g，在通入氮气的条件下，前驱体溶液在100 ℃下水浴回流反应，得到 CdSe 量子点溶液；在已合成的CdSe量子点溶液中快速注入壳层前驱体溶液，100 ℃加热回流，得到发射红绿色荧光的CdSe@ZnS 核壳结构量子点；

所述步骤（6）具体为氨基化磁珠为0.5 1mL，纳米金溶液为1 3mL，氨基化磁珠与纳米金~ ~

体积比1:4，超声震荡2 5min，磁分离去除上清，加入柠檬酸缓冲溶液为0.5 1mL；SH‑DNA的~ ~

浓度为 20 μM加入量为 25.1 50.2 µL ，孵育30 90min；加入红光CdSe@ZnS量子点100 500~ ~ ~

µL孵育1 4h；制备得到红色荧光探针，在紫外灯下，溶液呈现红色荧光；

~

所述步骤（7）具体为取50 200 µL修饰有巯基丙酸的绿光CdSe@ZnS量子点加入100 500~ ~

µLEDC活化，再与浓度为20 μM末端修饰氨基的DNA 30 72µL混合，孵育1 4h，制备得到绿色~ ~

荧光探针，在紫外灯下，溶液呈现绿色荧光；

所述步骤（8）具体为取红色荧光探针50 250 µL，绿色荧光探针50 250 µL，将混合探针~ ~

放入温度为75℃的水浴锅中，调水浴锅温度到25 65℃自然冷却，过程持续10‑30min；关闭~

水浴锅冷却至室温，探针构建完成，在紫外灯下溶液呈现红色荧光；

所述步骤C‑2具体为，采用上述方法制备的比率荧光生物探针分别用以下9个标准铅离子溶液处理，当探针溶液pH为9，孵育时间300 s时，在此范围比率荧光生物探针的荧光强度I540/I630的比值与铅离子浓度的对数具有线性相关性。