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专利号: 2019105994637
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,包括如下步骤:(1)取鱼头部软组织,捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液;

(2)待粗提液冷却至室温,冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤;

(3)用高效液相色谱测定滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量,所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15作为填料;高效液相色谱测定时,使用紫外检测器检测。

2.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中所述负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15的制备方法如下:A)将P123和NaF溶解在1‑2mol/L的盐酸溶液中,35‑45℃下搅拌至完全溶解;

B)向上述溶液中逐滴加入氰基乙基三乙氧基硅烷,搅拌20‑30min后再逐滴加入正硅酸乙酯,35‑45℃下搅拌6‑8h;

C)向上述溶液中加入1‑2mol/L的NaAlO2的盐酸溶液,35‑45℃下搅拌20‑30h;

D)用氨水将溶液pH调节到1.6‑1.7后,移入特氟龙内衬反应釜,并将反应釜置于100‑

200℃烘箱中活化36‑48h;

E)将反应釜从烘箱中取出,降至室温后用氨水将溶液的pH调节至5.5‑6.5,再置于100‑

200℃烘箱中活化36‑48h;

F)过滤后将产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后,60‑100℃下干燥8‑12h,得到氰基化Al‑SBA‑15;

G)将氰基化Al‑SBA‑15加入到质量分数为44%‑47%的硫酸溶液中,90‑100℃下搅拌反应

24‑36h,过滤、洗涤后,70‑90℃下干燥8‑12h,得到羧基化Al‑SBA‑15;

H)将羧基化Al‑SBA‑15分散在0.1‑0.2mol/L的CuSO4溶液中,搅拌反应20‑30h后抽滤,所得产物洗涤后在50‑70℃下干燥8‑10h;

I)将所得产物在马弗炉中500‑600℃下焙烧4‑5h,得到所述负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15。

3.根据权利要求2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤A)‑步骤C)中,溶液中NaF、P123、氰基乙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯、NaAlO2、HCl的质量比为1:(170‑180):(40‑45):(500‑550):(20‑50):(2600‑2800)。

4.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中所述提取液为蒸馏水、0.1mol/L NaOH溶液、0.6mol/L 盐酸中的一种。

5.根据权利要求1或4所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中加入提取液中的试样质量为(0.8g‑1.2g)/10mL。

6.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中加热提取的温度为75‑85℃,提取时间10‑20min。

7.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(2)中冷冻离心时的温度为0‑4℃,时间10‑20min,微孔滤膜孔径为0.45μm。

8.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中采用匀浆法将3.8‑4g负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15填料装入250mm×

4.6mm的不锈钢柱管中得到所述色谱柱,匀浆法中的溶液为体积比为90:10的正己烷‑异丙醇,装柱压力为40‑50MPa。

9.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中高效液相色谱法测定时,以pH为8‑9的20mmol/L磷酸盐缓冲液和甲醇为流动相,等梯度洗脱,其中甲醇的质量分数为1‑5%。

10.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中使用紫外检测器检测时,波长230nm,流速1.0mL/min,柱温35℃。