欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2019106759297
申请人: 河南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,所述的试剂盒由样品垫(1)、结合垫(3)、反应垫(2)、吸水垫(4)和PVC底板(5)组成,所述样品垫(1)、结合垫(3)、反应垫(2)和吸水垫(4)依次搭接在PVC底板(5)上,其特征在于:所述的反应垫(2)上设置有包被有抗CA125抗体的检测线T1、包被有抗HE4抗体的检测线T2、包被有羊抗鼠IgG的质控线C。

2.如权利要求1所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,其特征在于所述的样品垫(1)经样品垫处理液处理,样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、中性盐、牛血清白蛋白和吐温组成。

3.如权利要求2所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,其特征在于所述的中性盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化钡、硫酸钙、硝酸钾中的一种。

4.如权利要求3所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,其特征在于,所述样品垫处理液所含中性盐为氯化钠或氯化钾,浓度为300mM。

5.如权利要求4所述的纳米硒试剂盒,其特征在于,所述的样品垫处理液中的中性盐为氯化钠,浓度为300mM。

6.如权利要求1所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,其特征在于所述的纳米硒与抗HE4抗体和抗CA125抗体偶联的复合物经工作液悬浮固化于结合垫(3)上,所述工作液由磷酸盐缓冲液、中性盐、牛血清白蛋白、糖类和吐温组成,所述中性盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化钡、硫酸钙、硝酸钾中的一种;所述糖类选自单醣、双醣或多糖中的一种。

7.如权利要求6所述的纳米硒试剂盒,其特征在于,所述工作液中的糖类为蔗糖和海藻糖,所述的处理液和工作液的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L,pH为7.2。

8.如权利要求6所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒,其特征在于,所述中性盐浓度为150-500mM。

9.一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒的制备方法,包括以下步骤:(1)纳米硒的制备

取超纯水,加入PEG,搅拌,得PEG溶液;将SDS溶于PEG溶液中,搅拌,得模板溶液;将亚硒酸溶于模板溶液中,搅拌,得亚硒酸溶液;将维生素C溶于亚硒酸模板溶液中,搅拌,即得纳米硒;

(2)抗体标记

取1mL步骤(1)制备得到的纳米硒,加入10μL浓度为1mol/L的碳酸钾溶液,调节体系的pH值为7.5;再加入2μL的2mg/mL的Anti-HE4-Ab1,室温混合30min,使Anti-HE4-Ab1充分的结合到纳米硒粒子上,完成Anti-HE4-Ab1的标记;

取1mL步骤(1)制备得到的纳米硒,加入12μL浓度为1mol/L的碳酸钾溶液,调节体系的pH值为8.0;再加入3μL的2mg/mL的Anti-CA125-Ab1,室温混合30min,使Anti-CA125-Ab1充分的结合到纳米硒粒子上,完成Anti-CA125-Ab1的标记;

(3)封闭

向步骤(2)中纳米硒标记的Anti-CA125-Ab1和纳米硒标记的Anti-HE4-Ab1中加入牛血清白蛋白溶液,控制牛血清白蛋白的质量终浓度为1%,室温混匀30min;

(4)重悬

封闭后的纳米硒标记抗体在10000rpm下离心10min,弃去上清,沉淀用120μL的工作液重悬;

所述工作液由磷酸盐缓冲液、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和Tween-20组成,其中磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L,pH为7.2;氯化钠浓度为150mM,牛血清白蛋白质量终浓度为2%,蔗糖质量终浓度为3%,海藻糖质量终浓度为3%,Tween-20体积终浓度为0.1%;

磷酸盐缓冲液中,Na2HPO4·12H2O质量含量为0.26%,NaH2PO4·2H2O质量含量为0.044%;

(5)样品垫的制备

把GF-08玻璃纤维膜裁剪成220mm×100mm,浸泡在样品垫处理液中5min,然后在40℃的鼓风干燥箱中干燥12h,取出即得样品垫,放入自封袋中备用;

样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖和Tween-20组成,其中,磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L,pH为7.2,氯化钠浓度为300mM,牛血清白蛋白的体积终浓度为10%,Tween-20的体积终浓度为0.05%,蔗糖的质量浓度为7%,磷酸盐缓冲液中Na2HPO4·12H2O的质量含量为0.26%,NaH2PO4·2H2O的质量含量为0.044%;

(6)结合垫的制备

将步骤(2)纳米硒标记的Anti-HE4-Ab1和Anti-CA125-Ab1分别均匀的铺在GF-06玻璃纤维膜上,干燥,使标记抗体的纳米硒粒子固化在玻璃纤维膜上即得结合垫,取出放入自封袋,加入干燥剂,密封保存;

(7)反应垫的制备

将硝酸纤维素膜贴在PVC板上,然后用0.01mol/L,pH7.2的PBS把Anti-CA125-Ab2稀释至浓度为2mg/mL,作为T1检测线包被原;把Anti-HE4-Ab2稀释至浓度为1mg/mL,作为T2检测线包被原;把羊抗鼠IgG稀释为2mg/mL,作为质控线C包被原;用喷金划膜仪以1μL/cm划膜,置于40℃鼓风干燥3h即得反应垫,取出放入自封袋,备用;

(8)试剂盒组装

将结合垫贴在反应垫的前端,再将样品垫贴在结合垫的前端,最后将吸水纸的前端贴在反应垫的后端,另一端贴在PVC板的末端,即完成试纸条的组装,可得HE4联合CA125快速检测试剂盒。

10.一种样品垫处理液,其特征在于,所述样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、300mM氯化钠、牛血清白蛋白和吐温组成。