1.一种山苦荬药材指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)混合对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品11.59mg,咖啡酸对照品6.72mg、木樨草苷对照品13.60mg,分别置25ml量瓶中,加适量甲醇超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,再分别精密量取上述绿原酸贮备液1.5ml、咖啡酸贮备液1.5ml和木樨草苷贮备液6.0ml,置同一10ml量瓶中并用甲醇定容,摇匀,即得混合对照品溶液;
(2)供试品溶液的制备:取山苦荬样品2g,精密称定,置于150mL锥形瓶中,分别精密加入体积浓度为80%的甲醇溶液20mL,称定重量,进行超声提取60min,用体积浓度为80%的甲醇溶液补足损失重量,滤过,取续滤液过0.45nm微孔滤膜,即得;
(3)HPLC检测:色谱条件为用Atlantis T3 C18,4.6mm×250mm,5μm色谱柱;以甲醇‑0.2%‑1
磷酸水溶液为流动相,流速:1.0mL•min ,进样量:10µL,采用以下梯度洗脱的条件进行梯度洗脱:
(4)对照指纹图谱的建立:按照色谱条件,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定,记录色谱图,以木犀草苷峰作为参照峰,测定10批山苦荬药材的指纹图谱,对所得色谱数据进行处理,得到由其共有特征峰构成的山苦荬药材的对照指纹图谱,以确定的参照峰的保留时间和峰面积为基准,计算其它共有色谱峰的相对保留时间与相对峰面积,所述对照指纹图谱中,共有峰有16个,其中10号峰为木犀草苷峰;
(5)指纹图谱的质量控制:取待测药材制备供试品溶液,按上述色谱条件,将供试品溶液注入高效液相色谱仪检测,将所得色谱图与上述山苦荬药材的对照指纹图谱比较,计算相似度,识别所具有的共同吸收峰的数量,确定相似度,实现对山苦荬药材进行鉴别及质量控制;
所述的山苦荬的拉丁学名为:Ixeridium chinense (Thunb .) Tzvel .;
步骤(3)HPLC检测中,柱温为25℃,检测波长为330nm;
步骤(4)中所构建得到的山苦荬药材的对照指纹图谱具有16个共有特征峰,以参照物峰即10号峰相应的峰为S峰,所述16个共有特征峰的相对保留时间如下:峰1:0.2985,峰2:
0.3837,峰3:0.5063,峰4:0.7413,峰5:0.7887,峰6:0.8354,峰7:0.8707,峰8:0.8943,峰9:
0.9734,峰S:1.0000,峰11:1.0340,峰12:1.1367,峰13:1.1553,峰14:1.5518,峰15:
1.7250,峰16:1.7703。