1.采用一测多评法测定山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量的方法,其特征在于,步骤如下:
(1)对照品溶液的制备:精密称量绿原酸对照品11.59mg,咖啡酸对照品6.72mg、木犀草苷对照品13.60mg,分别加入25mL容量瓶中,加适量甲醇稀释至刻度,超声使其溶解,摇匀,精密量取上述绿原酸溶液1.5mL、咖啡酸溶液1.5mL和木犀草苷溶液6.0mL,置同一10mL容量瓶中并用甲醇定容至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液,混合对照品溶液每1mL溶液中含绿原酸69.54μg,咖啡酸40.32μg,木犀草苷326.4μg;
(2)供试品溶液的制备:取山苦荬药材粉末2g,置于100mL锥形瓶中,加入体积浓度为
70%的甲醇30mL,称定重量,超声提取60min,温度30℃,频率70kHz,放冷,用体积浓度为70%的甲醇补足减失的重量,过滤,取续滤液过微孔滤膜0.45µm,即得;
(3)色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:CAPCELLPAK TYPE MGⅡSIZE ‑C18;体积流量‑1
为1.0ml·min ;检测波长为330nm;柱温为25℃;进样量为5µL; 流动相采用甲醇‑0.2%磷酸水溶液进行梯度洗脱,洗脱程序见表1,理论塔板数按绿原酸峰计算不低于5000;
(4)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µL,注入液相色谱仪,在上述系统适应性的色谱条件下测定,采用内标法计算,供试品溶液的特征图谱中呈现绿原酸、咖啡酸和木犀草苷的峰值,以绿原酸为内参物,计算绿原酸与咖啡酸和木犀草苷的相对校正因子,通过相对校正因子计算山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量;
所述的山苦荬的拉丁学名为:Ixeridium chinense (Thunb .) Tzvel .;
所述的相对校正因子的计算方法为:分别吸取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液
0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 mL,分别置2.0 mL量瓶中,加体积浓度为70%的甲醇定容至刻度,摇匀,制成不同浓度的系列混合对照品溶液,按色谱条件测定,分别进样5μL,以绿原酸为内标,测定山苦荬中咖啡酸、木犀草苷的峰面积,按照相对校正因子计算公式fac=f a/fc=(Aa /Ca)/(Ac /Cc),计算常咖啡酸、木犀草苷的相对校正因子fac,式中用对照品来计算,Aa为内参物绿原酸的峰面积,Ca为内参物绿原酸的浓度, Ac为某待测成分峰面积; Cc为某待测成分浓度;相对校正因子fac为各实验所得数据的平均值。