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专利号: 2019107005988
申请人: 恩施德源硒材料工程科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种源于碎米荠的抗氧化硒多肽,其特征在于:其氨基酸序列为Gly-Arg-Val-Gly-Ser-Ser-Ser-SeCys,所述SeCys为硒代半胱氨酸。

2.一种制备如权利要求1所述的源于碎米荠的抗氧化硒多肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、打粉:将碎米荠整株烘干打粉,用无水乙醇脱色2h,以6400r/min离心15min,将沉淀风干,得到碎米荠粉末;

S2、酶解:将步骤S1中所述碎米荠粉末加入pH为8.5的缓冲液中,所述碎米荠粉末和缓冲液的比例为1g:40mL,再加入碱性蛋白酶进行第一次酶解,酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g,然后加入酸性蛋白酶进行第二次酶解,所述酶解温度、时间和酶-底物配比分别为50℃、4h和3000U/g,沸水浴灭酶15min后迅速冷却至室温,6400r/min离心15min,取上清液备用;

S3、超滤分离:将步骤S2中所述上清液并利用膜过滤系统进行超滤分离,利用分子量截留范围不同的超滤膜对酶解产物进行分离,得到不同分子量的多肽,包括>3000Da和≤

3000Da的组分;

S4、离子交换层析分离:收集步骤S3中所述>3000Da和≤3000Da的组分中具有最佳抗氧化活性的1,所述组分1经过SephadexDEAE-FF离子交换层析进行分离,以含0-1mol/LNaCl的

0.05mol/L、pH8.5Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱,流速为0.5ml/min,收集各组分比较其抗氧化活性,得到抗氧化强的组分2;

S5、RP-HPLC分离:采用RP-HPLC反相高效液相色谱进一步纯化步骤S4中所述组分2,所述反相高效液相色谱的色谱柱为C18,所述反相高效液相色谱洗脱条件为:柱温为20℃,洗脱液包括流动相A和流动相B,流动相A为纯乙腈,流动相B组成为0.05%三氟乙酸、5%乙腈和94.95%纯水,洗脱液流速为10mL/min,洗脱条件为0~5min 10%A、5~30min 100%A~

50%A、30~35min50%A~80%A、35~40min 80%A、40~45min 80%A~100%A和45~

50min 100%A,收集各组分,真空浓缩后冷冻干燥,比较各组分的抗氧化性能,抗氧化性能最强的组分即碎米荠抗氧化硒多肽。

3.一种如权利要求1所述的源于碎米荠的抗氧化硒多肽在抗氧化功能性食品中的应用。