1.一种负载抗癌药物喜树碱的纳米药物载体的荧光免疫定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤:（1）制备负载喜树碱的油胺枝接聚琥珀酰亚胺CPT@PSIOAm的包被抗原；

（2）制备FITC标记的抗PSIOAm抗体；

（3）将CPT@PSIOAm包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的CPT@PSIOAm标准品和FITC标记的抗PSIOAm抗体，建立直接竞争荧光免疫分析法定量检测CPT@PSIOAm；

（4）以CPT@PSIOAm标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线得出线性方程，从而定量检测出CPT@PSIOAm的浓度；

所述步骤（1）具体包括以下步骤：

（1‑1）将油胺枝接聚琥珀酰亚胺PSIOAm、喜树碱CPT、聚乙烯‑b‑聚乙二醇溶解于三氯甲烷中，然后加入到氢氧化钠溶液中，超声反应之后，蒸发除去三氯甲烷，离心，将沉淀分散在‑PBS缓冲溶液中，得到水解后的CPT@PSIOAm‑COO半抗原溶液；

‑

（1‑2）向CPT@PSIOAm‑COO半抗原溶液中加入含有N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的PBS缓冲溶液反应10 20min，然后加入鸡卵清白蛋白，温~育后，离心，所得沉淀分散于PBS缓冲液中，即可得到所述CPT@PSIOAm的包被抗原；

步骤（1‑1）中，所述PSIOAm、喜树碱、聚乙烯‑b‑聚乙二醇、三氯甲烷、氢氧化钠的用量之比为（10 60）mg：（0.5 2）mg：（0.5 2）mL：（2 16）mL；所述超声反应的条件为200 400W超声5~ ~ ~ ~ ~ ~

10min；

‑

所述步骤（1‑2）具体包括以下步骤：向1mL CPT@PSIOAm‑COO 半抗原溶液中加入1mL含有

0.1 1 mg的N‑羟基琥珀酰亚胺和0.1 1 mg的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸~ ~盐的PBS缓冲溶液，反应10 20min后，加入1 10mg鸡卵清白蛋白，于25℃下温育2 4 h，离心~ ~ ~

10~15min，取沉淀分散到3mL中性PBS缓冲液中，即可制得CPT@PSIOAm的包被抗原；

所述步骤（2）具体包括以下步骤：将PSIOAm抗体溶液与异硫氰酸荧光素溶液混合，避光搅拌反应3~6h，反应结束后经透析、凝胶过滤法纯化，得到FITC标记的抗PSIOAm抗体。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PSIOAm抗体溶液为PSIOAm抗体溶解在0.01M pH7.1的PBS缓冲液中得到，其蛋白浓度为10 20mg/mL；所述异硫氰酸荧光素溶液~为异硫氰酸荧光素溶于pH=9.6碳酸盐缓冲液中得到，其浓度为2mg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述PSIOAm抗体溶液与异硫氰酸荧光素溶液的体积之比为10:1；所述凝胶过滤纯化的洗脱液为0.01M的pH 7.1的PBS缓冲溶液，流速为0.1 0.5mL/min。

~

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（3）具体包括以下步骤：（3‑1）包被：用包被缓冲液将CPT@PSIOAm包被抗原稀释80倍，包被96孔酶标板，每孔100µL，4℃冰箱过夜；

（3‑2）封闭：PBST溶液洗涤96孔酶标板3次，每次3 5min，然后加入1wt%酪蛋白封闭，每~孔200µL，37℃温育1~2h；PBST溶液洗涤的目的是洗去未被结合上的CPT@PSIOAm包被抗原；

（3‑3）加样竞争：PBST溶液洗涤96孔酶标板3次，每次3 5min，然后将50µL不同浓度的~CPT@PSIOAm标准液和50µL FITC标记PSIOAm抗体提前混匀分梯度加入各孔中，37℃温育1~2h，之后用洗涤液洗涤2 4次，每次3 5分钟并甩干；

~ ~

（3‑4）在酶标仪上测定各孔在激发波长为485nm、发射波长为525nm时的荧光强度。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中，所述标准曲线的线性方程2

为F=8116.6‑311.7lgC，F为荧光强度，C为CPT@PSIOAm的浓度；相关系数R =0.991，线性范围为0.12‑1638.7ng/mL，检出限为0.04ng/mL。