1.一种基于聚多巴胺‑二氧化钛复合材料修饰玻碳电极的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于:以mg和mL计,制备方法包括以下步骤:
1)聚多巴胺的制备:向容器中加入8 10ml无水乙醇和18 20ml去离子水,随后加入~ ~
0.898g/ml 0.907g/ml的500‑700ul浓氨水;将所得混合溶液搅拌20‑40min后,缓慢加入45‑~
55mg/ml 的1.5‑2.5ml多巴胺溶液;在常温下搅拌反应,将所得溶液离心后,取固体即为聚多巴胺;
2)纳米二氧化钛的制备:取20‑30ml无水乙醇,依次加入0.8‑1.2ml正丁醇、0.8‑1.2ml聚乙二醇、0.35‑0.40ml氢氟酸、0.8‑1.2ml乙二醇和0.4‑0.6ml去离子水,搅拌15 20min,配~制成溶液A;再取2.5‑3.5ml钛酸四丁酯,加入8‑12ml无水乙醇,搅拌15 20min配成溶液B;将~溶液B以3.5‑4.5ml/h的注射速度注入溶液A,同时剧烈搅拌溶液A,待注射完毕后继续搅拌3
5h;将搅拌好的溶液在140‑160℃下并辅搅拌3.5 4h,至反应结束,分别用去离子水、正丁~ ~醇和无水乙醇离心洗涤,将洗净所得的产物烘干,研磨后煅烧,得到纳米二氧化钛;
3)玻碳电极预处理:工作玻碳电极在麂皮上用纳米级氧化铝和去离子水进行打磨抛光;然后用无水乙醇浸泡超声清洗,最后用去离子水超声清洗;
4)在电极表面滴加2‑4ul浓度为8‑12ug/L的聚多巴胺溶液,烘干后用PBS缓冲液洗净,继续滴加2‑4ul浓度为8‑12ug/L的纳米二氧化钛溶液于电极表面,烘干后即制得聚多巴胺/二氧化钛GCE电极;
5)清洗烘干电极,室温干燥后在电极表面滴加18‑22μL 0.04‑0.06M 的3‑羟基丙酸水溶液,孵育0.5‑1.5h形成饱和3‑羟基丙酸单层,然后用PBS缓冲液彻底清洗,将修饰有3‑羟基丙酸的电极在含有0.04‑0.06M EDC和0.02‑0.04M N‑羟基琥珀酰亚胺的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液中孵育0.5‑1.5h,将3‑羟基丙酸的末端羧基转化为活性N‑羟基琥珀酰亚胺酯;再取4‑6ul 8‑12ug/mL的丝素蛋白抗体溶液,滴涂至电极表面,室温下晾干,用PBS缓冲液洗净未固定的抗体,得抗体/聚多巴胺/二氧化钛/GCE修饰电极;随后,用BSA溶液封闭20‑40min,以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点,取出后用PBS缓冲液洗净,晾干,得丝素蛋白电化学免疫传感器。
2.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤1)中,加入多巴胺溶液后的搅拌时间为25‑35h,搅拌时避光,离心条件为9000‑11000rpm,4‑6min。
3.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤2)中,将洗净所得的产物在55‑65℃下烘干,研磨1 2h后在420‑440℃煅烧20‑40min,得到纳米二氧化钛。
~
4.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤3)中,用无水乙醇浸泡超声清洗8‑12min;最后用去离子水超声清洗8‑12min。
5.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤4)中,在室温下烘干。
6.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤4)至步骤5)中,所述PBS缓冲液的pH=7.4。
7.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤5)中,所述BSA溶液的浓度为0.8‑1.2wt%。