1.一种荧光探针，其特征在于，该探针利用绿色荧光蛋白iLOV和具有long-stokes位移的红色荧光蛋白mBeRFP荧光蛋白制备而成，用于细胞内pH值和氧化还原状态的双重监测；

应用时，利用iLOV蛋白荧光变化检测氧化还原状态，利用mBeRFP蛋白荧光变化检测pH值；具体通过如下步骤制备而成：（1）构建含有iLOV基因序列的重组质粒pYES2-iLOV

以pGEX-iLOV为模板，PCR获得iLOV序列；然后对PCR扩增产物和pYES2质粒分别进行HindIII、BamHI双酶切，并将PCR扩增后的iLOV酶切产物进一步与pYES2连接重组，构建获得重组质粒pYES2-iLOV；

（2）构建含有BeRFP基因序列的重组载体pYES2-pHaROS

以pRSET-BeRFP为模板，PCR扩增获得BeRFP序列；对PCR扩增产物进行EcoRI、XhoI双酶切，同时对步骤（1）中所构建的pYES2-iLOV质粒进行EcoRI和XhoI双酶切，再进一步对酶切产物进行连接重组，构建获得重组载体pYES2-pHaROS载体；

（3）构建含有启动子的pACT- pHaROS载体

将pYES2的诱导型启动子替换为稳定表达启动子pACT；具体而言：

对步骤（2）中所构建的pYES2-pHaROS载体进行SpeI、HindIII双酶切，与pACT进行连接重组，构建获得重组的pACT-pHaROS载体；

所述pACT序列如SEQ ID NO.1所示，具体如下：

AAAACCCTTAAAAACATATGCCTCACCCTAACATATTTTCCAATTAACCCTCAATATTTCTCTGTCACCCGGCCTCTATTTTCCATTTTCTTCTTTACCCGCCACGCGTTTTTTTCTTTCAAATTTTTTTCTTCCTTCTTCTTTTTCTTCCACGTCCTCTTGCATAAATAAATAAACCGTTTTGAAACCAAACTCGCCTCTCTCTCTCCTTTTTGAAATATTTTTGGGTTTGTTTGATCCTTTCCTTCCCAATCTCTCTTGTTTAATATATATTCATTTATATCACGCTCTCTTTTTATCTTCCTTTTTTTCCTCTCTCTTGTATTCTTCCTTCCCCTTTCTACTCAAACCAAGAAGAAAAAGAAAAGGTCAATCTTTGTTAAAGAATAGGATCTTCTACTACATCAGCTTTTAGATTTTTCACGCTTACTCTTTTTTCTTCCCAAGATCGAAAATTTACTGAATTAACA。

2.权利要求1所述荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

（1）构建含有iLOV基因序列的重组质粒pYES2-iLOV

以pGEX-iLOV为模板，PCR获得iLOV序列；然后对PCR扩增产物和pYES2质粒分别进行HindIII、BamHI双酶切，并将PCR扩增后的iLOV酶切产物进一步与pYES2连接重组，构建获得重组质粒pYES2-iLOV；

（2）构建含有BeRFP基因序列的重组载体pYES2-pHaROS

以pRSET-BeRFP为模板，PCR扩增获得BeRFP序列；对PCR扩增产物进行EcoRI、XhoI双酶切，同时对步骤（1）中所构建的pYES2-iLOV质粒进行EcoRI和XhoI双酶切，再进一步对酶切产物进行连接重组，构建获得重组载体pYES2-pHaROS载体；

（3）构建含有启动子的pACT- pHaROS载体

将pYES2的诱导型启动子替换为稳定表达启动子pACT；具体而言：

对步骤（2）中所构建的pYES2-pHaROS载体进行SpeI、HindIII双酶切，与pACT进行连接重组，构建获得重组的pACT-pHaROS载体；所述pACT序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，PCR扩增时，引物序列设计如下：正向引物iLOV-F为5' –CGAAGCTTCCAATGTCTATAGAGAAGAATTTCGTC-3'，反向引物iLOV-R为5'- GCTGGATCCGCTATACATGATCACTTCCATC-3'。

4.如权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，PCR扩增时，引物序列设计如下：正向引物BeRFP-F：5’-GAATTCATGGTGTCTAAGGGCGAAGAG-3’，反向引物BeRFP-R：5’-CTCGAGTATTAAGTTTGTGCCCCAGTTTG-3’。

5.如权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，启动子序列pACT来自于BY4741酵母基因组，以PCR扩增方式获得，PCR扩增时，引物序列设计如下：正向引物pACT-F：5’-GAACTAGTCAAAACCCTTAAAAACATATGC-3’，反向引物pACT-R：5’-AGAAAGCTTTGTTAATTCAGTAAATTTTCGATC-3’。

6.利用权利要求1所述荧光探针所构建的定位荧光探针，其特征在于，将pACT-pHaROS载体进一步重组结合不同的细胞器定位序列，构建获得定位于不同细胞器的荧光探针，具体而言：定位于细胞核的pHaROS-T探针：以SV40 T抗原的7个氨基酸PKKKRKV序列作为细胞核定位序列，将7个氨基酸PKKKRKV对应编码碱基序列重组进入pACT-pHaROS载体；

所述7个氨基酸PKKKRKV对应编码碱基序列如SEQ  ID  NO.2所示，具体为：CCAAAAAAGAAAAGAAAAGTG；

定位于过氧化物酶体的pHaROS-SKL探针：以serine-lysine-leucine组成的过氧化物酶体定位信号作为定位序列，将对应碱基序列重组进入pACT-pHaROS载体；

所述serine-lysine-leucine组成的过氧化物酶体定位信号对应的碱基序列具体为：TCCAAACTT；

定位于线粒体的SU9-pHaROS探针：以Su9线粒体定位序列作为定位序列，将对应碱基序列重组进入pACT-pHaROS载体；

所述Su9线粒体定位序列对应碱基序列如SEQ ID NO.3所示，具体为：ATGGCCTCCACTCGTGTCCTCGCCTCTCGCCTGGCCTCCCGGATGGCTGCTTCCGCCAAGGTTGCCCGCCCTGCTGTCCGCGTTGCTCAGGTCAGCAAGCGCACCATCCAGACTGGCTCCCCCCTCCAGACCCTCAAGCGCACCCAGATGACCTCCATCGTCAACGCCACCACCCGCCAGGCTTTCCAGAAGCGCGCCTACTCTTCCGGATTC。

7.权利要求1或6所述荧光探针在细胞状态检测中应用，其特征在于，用于细胞内部或者具体细胞器内部的pH值和/或细胞氧化还原状态检测。

8.如权利要求7所述荧光探针在细胞状态检测中应用，其特征在于，所述细胞为真核细胞；所述细胞器为：细胞核、过氧化物媒体、线粒体。

9.利用权利要求1或6所述荧光探针的细胞pH值和/或细胞氧化还原状态检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）质粒转化

将所构建的pACT-pHaROS载体探针、或所构建的细胞器定位载体探针转化细胞，并筛选获得阳性转化菌株；

（2）观察检测

利用激光共聚焦显微镜，观察并记录细胞内iLOV蛋白和BeRFP蛋白的荧光比率，从而进一步判断细胞内、或具体细胞器内的pH值和/或细胞氧化还原状态；具体应用时：利用iLOV蛋白荧光变化检测氧化还原状态，利用mBeRFP蛋白荧光变化检测pH值。