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专利号: 2019108141458
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高酿酒酵母橙花叔醇产量的方法,其特征在于所述方法为:在敲除Gal80基因的酿酒酵母中,使用Gal启动子驱动甲羟戊酸途径代谢酶和橙花叔醇合成酶的表达形成二次生长诱导系统,同时过表达转录因子hac1基因,构建得到合成橙花叔醇的酵母工程菌。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述酿酒酵母为酵母CEN.PK2-1D。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述Gal启动子包括Gal1、Gal10和Gal2。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述甲羟戊酸途径代谢酶包括乙酰辅酶A乙酰转移酶ERG10、法尼烯焦磷酸合成酶ERG20、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶HMGR、磷酸甲羟戊酸激酶ERG8、甲羟戊酸激酶ERG12、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶MVD1、3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶ERG13。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于所述Gal启动子驱动甲羟戊酸途径代谢酶的表达是将甲羟戊酸途径代谢酶基因中的一种或多种采用Gal启动子驱动导入酿酒酵母进行表达。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述橙花叔醇合成酶为来源于猕猴桃(Actinidia chinensis)的橙花叔醇合成酶AcNES1,通过将SEQ ID NO.2所示编码基因AcNES1克隆至pYES2载体GAL1启动子后,导入酿酒酵母进行表达。

7.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述转录因子hac1基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

8.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述hac1基因的过表达按如下方法进行:将Hac1基因与TDH3启动子整合到基因组位点YPRCtau3,或者在pRS316质粒上组成型过表达Hac1,或者在pRS316质粒上过表达Gal1启动子驱动的Hac1。

9.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述酿酒酵母工程菌培养方法为:将酿酒酵母工程菌接种至葡萄糖合成最小培养基,在30℃、摇瓶转速200rpm下培养过夜,取培养物接种至18mL蔗糖合成最小培养基,使得初始OD600达到0.2,再加入2mL十二烷,在30℃、摇瓶转速

200rpm条件下培养96h,培养物离心,得到含有橙花叔醇的十二烷有机相;所述葡萄糖合成最小培养基质量终浓度组成:2%蔗糖,0.17%酵母氮源,0.5%硫酸铵和微量营养素,溶剂为蒸馏水,pH 5.0;其中微量营养素是指色氨酸、组氨酸、亮氨酸和尿嘧啶,它们在培养基中的终浓度均为20mg/L。

10.如权利要求9所述的方法,其特征在于微量营养素为组氨酸。