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专利号: 2019108338536
申请人: 湖南宇山玉月农业科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2025-03-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,以裂裥菌素对照品为参照,采用高压液相色谱法测定其指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:将白参菌冷冻干燥,粉碎,取5-20g,精密称定,加入 10%醋酸50-

100ml浸泡24h,再加50-70%甲醇超声提取1-2小时,放冷,再称定重量,加甲醇补足重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;

(2)对照品溶液1的制备:取裂裥菌素对照品5 10mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解,并~稀释至刻度,摇匀,精密吸取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;

(3)对照品溶液2的制备:分别取氨基酸混合对照品5 10mg,置50ml量瓶中,加0.05mol/~L盐酸使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;

(4)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 15μl,注入液相色谱仪,记录~

50min分钟内的色谱图,用指纹图谱软件对图谱进行处理,即得白参菌的指纹图谱。

3.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述氨基酸混合对照品选自8种人体必需氨基酸和其他非必需12种氨基酸,8种人体必需氨基酸分别为缬氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,苏氨酸,甲硫氨酸,赖氨酸,苯丙氨酸和色氨酸,非必需12种氨基酸分别为半胱氨酸、丝氨酸、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、精氨酸、组氨酸、脯氨酸。

4.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤 :(1)供试品溶液的制备:将白参菌冷冻干燥,粉碎,取5-20g,精密称定,加入 10%醋酸

80ml浸泡24h,再加55%甲醇超声提取1小时,放冷,再称定重量,加甲醇补足重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;

(2)对照品溶液1的制备:取裂裥菌素对照品6mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀。精密吸取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;

(3)对照品溶液2的制备:分别取氨基酸混合对照品5mg,置50ml量瓶中,加0.05mol/L盐酸使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;

(4)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录50min分钟内的色谱图,用指纹图谱软件对图谱进行处理,即得白参菌的指纹图谱。

5.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述高压液相色谱测定的色谱条件为:采用MCI GEL SCA04(4.6×150mm)色谱柱,以甲醇为流动相 A,以5%甲醇-水为流动相B,梯度洗脱,流速1-10ml/min,柱温25 40℃,检测波长185-400nm;理论塔板~数按裂裥菌素峰计算应不低于3000。

6.根据权利要求3所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述色谱测定的梯度洗脱过程为:分钟 A(甲醇) B(5%甲醇-水)

0 15 8→55 92→45

~

15 25 55 45

~

25 50 55→88 45→12~

50 70 88 12

~

7.如权利要求1~6中任一项所述白参菌的指纹图谱检测方法得到的白参菌指纹图谱,其特征在于:所述图谱中有17个共有峰。

8.根据权利要求7所述白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,以7号为对照峰,17个共有峰相对保留时间及相对相对峰面积及峰归属如下表:峰号 相对保留时间 相对峰面积 峰归属

1 0.101 0.198 异亮氨酸

2 0.193 0.242 精氨酸

3 0.509 0.438 亮氨酸

4 0.579 0.667 天冬氨酸

5 0.816 0.292 丙氨酸

6 0.860 0.229 缬氨酸

7 1.000 1.000 裂裥菌素

8 1.088 0.458 苏氨酸

9 1.241 0.625 天冬酰胺

10 1.325 0.125 组氨酸

11 1.390 0.146 甲硫氨酸

12 1.561 0.188 丝氨酸酪氨酸

13 1.754 0.167 色氨酸

14 1.842 0.938 谷氨酸

15 2.206 0.208 赖氨酸

16 2.263 0.104 苯丙氨酸

17 2.732 0.167 脯氨酸。