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专利号: 2019108347501
申请人: 桂林理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种以血清中人肌钙蛋白I(cTnI)为靶蛋白的超高灵敏度非荧光标记免疫分析传感器的制备方法,其特征为:

1)  配制10  mmol/L  PBST包被液:  定容于浓度为10  mmol/L、pH值为7.2的PBS  Buffer溶液,得到体积浓度0.5%的Tween‑20、5%的蔗糖、5%的甲醇、2%的BSA;

2)  以终体积为90%的1)所述10  mmol/L  PBST包被液,10%的5  mol/L  NH4Cl制备FITC用双水相缓冲体系;

3)  以1)所述10  mmol/L  PBST包被液为溶剂,分别制备人cTnI抗原溶液、小鼠抗人cTnI抗体溶液;

4)  以2)所述FITC用双水相缓冲体系为溶剂制备FITC溶液;

5)  采用点膜划线方法,将4)所述FITC溶液均匀涂布包被于硝酸纤维素膜表面,以此设置检测线和质控线的基底线,42℃下干燥使其稳定,得到FITC荧光条带;

6)  采用点膜划线方法,将3)所述人cTnI抗原溶液作为质控线、小鼠抗人cTnI抗体溶液作为检测线均匀覆盖包被于5)所述的FITC荧光条带表面,42℃下干燥使其稳定,得到完成包被处理的硝酸纤维素膜组件;

7)  以10  mmol/L、pH值为7.2的PBS  Buffer溶液为处理液对样品垫、金标垫进行水化处理,随后在50℃下干燥;

8)  以10%BSA溶液为封闭液对样品垫、金标垫进行封闭处理,随后在42℃下干燥;

9)  采用化学还原法制备AuNPs,将体积浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸,并加入一定量1%柠檬酸三钠制备得到粒径为30nm的AuNPs颗粒,并采用该AuNPs溶液制备AuNPs标记小鼠抗人cTnI抗体溶液,离心纯化备用;

10)  采用9)所述的AuNPs标记抗体溶液对金标垫进行喷涂点样处理,在42℃下干燥备用;

11)  将6)所述硝酸纤维素膜、10)所述金标垫、吸水垫、8)所述样品垫依次组装在PVC底板上。