1.一种以血清中人肌钙蛋白I(cTnI)为靶蛋白的超高灵敏度非荧光标记免疫分析传感器的制备方法,其特征为:
1) 配制10 mmol/L PBST包被液: 定容于浓度为10 mmol/L、pH值为7.2的PBS Buffer溶液,得到体积浓度0.5%的Tween‑20、5%的蔗糖、5%的甲醇、2%的BSA;
2) 以终体积为90%的1)所述10 mmol/L PBST包被液,10%的5 mol/L NH4Cl制备FITC用双水相缓冲体系;
3) 以1)所述10 mmol/L PBST包被液为溶剂,分别制备人cTnI抗原溶液、小鼠抗人cTnI抗体溶液;
4) 以2)所述FITC用双水相缓冲体系为溶剂制备FITC溶液;
5) 采用点膜划线方法,将4)所述FITC溶液均匀涂布包被于硝酸纤维素膜表面,以此设置检测线和质控线的基底线,42℃下干燥使其稳定,得到FITC荧光条带;
6) 采用点膜划线方法,将3)所述人cTnI抗原溶液作为质控线、小鼠抗人cTnI抗体溶液作为检测线均匀覆盖包被于5)所述的FITC荧光条带表面,42℃下干燥使其稳定,得到完成包被处理的硝酸纤维素膜组件;
7) 以10 mmol/L、pH值为7.2的PBS Buffer溶液为处理液对样品垫、金标垫进行水化处理,随后在50℃下干燥;
8) 以10%BSA溶液为封闭液对样品垫、金标垫进行封闭处理,随后在42℃下干燥;
9) 采用化学还原法制备AuNPs,将体积浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸,并加入一定量1%柠檬酸三钠制备得到粒径为30nm的AuNPs颗粒,并采用该AuNPs溶液制备AuNPs标记小鼠抗人cTnI抗体溶液,离心纯化备用;
10) 采用9)所述的AuNPs标记抗体溶液对金标垫进行喷涂点样处理,在42℃下干燥备用;
11) 将6)所述硝酸纤维素膜、10)所述金标垫、吸水垫、8)所述样品垫依次组装在PVC底板上。