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专利号: 2019108817174
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2025-04-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法,其特征在于:包括以下步骤:

1)酶解:金枪鱼鱼卵匀浆液中加入蒸馏水,再加入1.8~2.5%的胰蛋白酶酶解,灭活后离心去上清;

2)浸提:酶解后的滤饼中加入丙酮,25℃磁力搅拌10min,抽滤,用丙酮浸提4~6次,至丙酮不变色;

3)二次浸提:浸提后的滤饼中加入无水乙醇,维持25~30℃,在提供440~460W功率微波条件下间断微波浸提;

4)纯化:硅胶层析柱中填充100~200目硅胶,预设静置沉降完成后将含有卵磷脂粗品的CHCl3-CH3OH混合溶液上样,以CHCl3-CH3OH(2:1)混合液为洗脱液,流速为30~45滴/min对其进行洗脱,收集洗脱液并干燥即得卵磷脂纯品。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在进行步骤3)二次浸提时,无水乙醇的添加量是滤饼体积的10.3~14.3倍。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在进行步骤3)二次浸提时,间断微波浸提具体指按照微波10s:关闭微波5~7min的间断微波方式完成总时长90~120s的微波浸提、共计时长50~80min的浸提。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:在进行步骤4)纯化时,硅胶需置于120℃烘箱中活化过夜,放真空干燥箱中降温,冷却后置于CHCl3浸泡12h。

5.根据权利要求1~4任一项所述的方法,其特征在于:在进行步骤4)纯化时,需将活化后的硅胶搅拌均匀,加入层析柱内,硅胶沉降完全后打开活塞,慢慢流出CHCl3,以胶头滴管继续滴加硅胶,当层析柱内硅胶距离上端约6cm,停止加硅胶,静置沉降12h;之后方可上样。

6.提供一种包含金枪鱼鱼卵卵磷脂的纳米脂质体,所述纳米脂质体的制备步骤包括:a)依据上述第一个方面方法制备金枪鱼鱼卵卵磷脂,然后将卵磷脂和胆固醇按照1.8~2.0:1的质量比混合并以适量氯仿溶解,然后在不高于28℃的温度下旋转蒸发,得到一层干燥的磷脂薄膜;

b)加入氯仿质量1/3~1/2的D-Hanks振荡混匀,超声处理直到其成为均匀的乳白色悬浊液,通过200nm的微孔滤膜过滤得到。

7.根据权利要求6所述的纳米脂质体,其特征在于:适量氯仿可以是卵磷脂和胆固醇混合物质量的5~100倍。

8.根据权利要求6所述的纳米脂质体,其特征在于:所述超声处理具体指超声频率30~

80KHz、能量密度0.4~0.6W/cm2。

9.权利要求6~8任一项所述纳米脂质体在抑制人肝癌HepG2细胞活性中的应用。

10.权利要求1~5任一项所述金枪鱼鱼卵卵磷脂在降脂中的应用,其特征在于:a)所述金枪鱼鱼卵卵磷脂由第一个方面所述方法制备得到;

b)所述应用具体为降低Chang liver细胞的脂质堆积。