1.基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：首先将序列T1和T2以相同的浓度混合，高温变性并退火形成双链，在妥布霉素存在的情况下，双链序列中T1的适配体部分识别妥布霉素并与之结合，使T2的3’端暴露出来，然后加入引物1、引物

2、Nt.BstNBI切刻内切酶、Bsm DNA聚合酶和游离的脱氧核糖核苷三磷酸到反应体系中，Bsm DNA聚合酶通过强链置换反应合成完全互补的双链，Nt.BstNBI切刻内切酶切割双链上的识别位点产生大量的报告探针；

其次将三条单链DNA S1、S2和S3经高温变性和退火形成的三向DNA结构与报告探针杂交，触发λ核酸外切酶辅助的环路扩增，使得报告探针再生并置换出大量含有G-四链体形成序列的S1链；

在加入血红素后，G-四链体/血红素催化ABTS2-/H2O2发生显色反应， UV-vis分光光度计测量吸光度，利用吸光值与妥布霉素的浓度的线性关系计算样品中的妥布霉素含量。

2.根据权利要求1所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：所述T1、T2、引物1和引物2序列具体为：T1: 5’-CTG CCG TGA CTA GGC ACT AGT CTC AAC GAG TCG CGT-3’；

T2: 5’-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT TGA TGA CTC GTT GAC TTA TCC CAA TTG TCA CGG CAG-3’；

引物1: 5’- CTG CCG-3’ ；

引物2: 5’-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT ACG CGA CTC G-3’；

所述S1、S2及S3序列具体为：

S1: 5’-P-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT TCT CGG TGT GAC AGG CAA CTC CGG GTT GGG CGG GAT GG-3’；

S2: 5’-TTA ATT ATA ATA ACC AGT TGC CTG GAT GAT CGA GA-3’；

S3: 5’-P-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT CCC ATC CCG CCC AAC CCC CTT ATT ATA ATT AA-3’。

3.根据权利要求2所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：所述S1和S3为5’端修饰磷酸基团的DNA序列。

4.根据权利要求1所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于具体步骤如下：（1）靶标识别：T1包含妥布霉素适配体序列及与T2和引物2互补的序列，将T1和T2以相同的浓度混匀，在95℃高温变性后再于37℃复性形成部分互补双链；将10 50 nM双链与4 μ~L不同浓度的妥布霉素溶液混匀，在37℃孵育30 min；

（2）等温扩增体系：取步骤（1）所得混合液，加10 60 nM引物1、10 60 nM引物2、1 6 U ~ ~ ~-1

Nt.BstNBI切刻内切酶、1.6 9.6 U Bsm DNA聚合酶、1×缓冲液以及2 μL，10 mmol·L 游离~的脱氧核糖核苷三磷酸，混匀后在55℃孵育30 150 min，产生大量的报告探针；

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（3）准备三向DNA结构：首先将均为0.5 4 μmol·L-1的，10 μL的S1，10 μL的S2和10 μL~的S3混合，在95℃下加热5 min，然后逐渐冷却至室温；此后，取混合后的30 μL DNA混合物在25℃温育60 min以构建三向DNA结构；

（4）形成G-四链体/血红素：将步骤（2）所得混合液与步骤（3）所得混合溶液混匀，在37℃孵育120 min；加入1 6 U λ核酸外切酶，1×λ核酸外切酶反应缓冲液，混匀后在37℃酶促~反应30 150 min产生大量单链S1；然后加入400 μL工作缓冲液和10 μL氯化血红素，并将混~合物在25℃温育60 min以形成G-四链体/血红素复合物；

（5）吸光度检测和标准曲线绘制：在步骤（4）反应溶液中加入20 μL 50 mmol·L-1 ABTS和10 μL体积浓度为0.3%的H2O2并在37℃下孵育10 min，使用UV-vis分光光度计读取空白以及含有妥布霉素的溶液在420 nm的吸光值；

根据测定吸光值与加入妥布霉素的浓度之间的关系，绘制出相应的线性关系曲线；

（6）实际样品检测：将含有妥布霉素的水样以步骤（1）（5）所述操作，测定出相应的吸~光值，从标准曲线中计算出相应的妥布霉素浓度。

5.根据权利要求4所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：步骤（2）中的缓冲液具体为含有100 mmol·L-1 NaCl，50 mmol·L-1 Tris-HCl，10 mmol·L-1 MgCl2，0.1 mg·mL-1 BSA的混合溶液。

6.根据权利要求4所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：步骤（4）所述λ核酸外切酶反应缓冲液具体为含有67 mmol·L-1 Glycine-KOH，2.5 mmol·L-1 MgCl2，50 mg·mL-1 BSA的混合溶液；

工作缓冲液具体为50 mmol·L-1 Tris-HCl，150 mmol·L-1 NH4Cl，20 mmol·L-1 KCl，体积浓度为0.03% Triton-X-100，pH 7.5；

氯化血红素储备溶液溶解于二甲基亚砜，用上述工作缓冲液稀释氯化血红素储备溶液至20 μmol·L-1。

7.根据权利要求4所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：步骤（5）中ABTS储备溶液溶解于二甲基亚砜。

8.根据权利要求4所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：步骤（6）中妥布霉素的浓度具体为20 800 nmol·L-1。

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