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专利号: 2019109738038
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种青蛤寡肽的制备方法,所得青蛤寡肽的氨基酸序列为Ile-Leu-Tyr-Met-Pro,其特征在于,包括以下步骤:(1)将新鲜的青蛤洗净后、去壳,取内脏,清洗干净后匀浆处理得到青蛤匀浆液;

(2)将青蛤匀浆液与复配溶剂按料液比1:2~4混合均匀获得浸泡液,所用复配溶剂为离子液体EMIMBF4与γ-丁内酯按体积比1:1混合制成;

(3)降低浸泡液温度至-50~-60℃,向浸泡液中通入脉冲电场处理,然后升至室温;

(4)离心分离步骤(3)处理后的浸泡液,回收上清液,去离子水洗涤固体并离心分离得到内脏破碎物;

(5)向内脏破碎物中加入木瓜蛋白酶溶液处理得到酶解液,灭酶活性,离心分离;

(6)将步骤(5)中离心分离后的上清液经滤膜过滤后,超滤膜处理,截留分子量小于

3kDa的分子段产物得到粗肽液;

(7)将粗肽液经层析分离,收集MIT法抑制率最高的峰对应的组份,然后经HPLC分离纯化,收集MIT法抑制率最高的峰对应的组份,冷冻干燥,得到青蛤寡肽。

2.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中的脉冲电场处理方法为:脉冲数为200~280次,电场强度17~20kV/cm,脉冲宽度为50~60μs,脉冲频率

1500~2000Hz,浸泡液在-50~-60℃保持时间为7~8小时。

3.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)中将浸泡液离心分离3~5次,然后去离子水洗涤3~5次并离心分离。

4.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中木瓜蛋白酶的酶解时间2~8小时、酶解温度45~60℃、料液比1:1~4、pH值为5.5~7.0、酶加入量为600~

1500 U/g。

5.根据权利要求1或4所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中木瓜蛋白酶的酶解时间4小时、酶解温度45℃、料液比1:4、pH值为7.0、酶加入量为1500 U/g。

6.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(7)中层析分离的色谱柱填料为琼脂糖凝胶,检测波长280 nm。

7.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,HPLC所用色谱柱为ZORBAXSB-C18分析型色谱柱,检测波长214、280 nm。

8.根据权利要求1所的青蛤寡肽的制备方法,其特征在于,离心分离的温度为在0 4℃,~离心转速10000~12000 r/min。