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专利号: 2019109738108
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,所述被太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的氨基酸序列为Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser,其特征在于,包括以下步骤:(1)取北太平洋鱿鱼缠卵腺捣碎后匀浆处理得到匀浆液;

(2)将匀浆液与复配溶剂按料液比1:2~5混合均匀获得浸泡液,所用复配溶剂为离子液体EMIMBF4与γ-丁内酯按体积比1:1混合制成;

(3)降低浸泡液温度至-50~-60℃的低温,向浸泡液中通入脉冲电场处理,然后升至室温;

(4)离心分离步骤(3)处理后的浸泡液,回收上清液,去离子水洗涤固体并离心得破碎物;

(5)向破碎物中加入碱性蛋白酶溶液处理得到酶解液,灭酶活性,离心分离;

(6)将步骤(5)中离心分离后的上清液经0.22μm滤膜过滤后,超滤膜处理,截留分子量在3~5kDa的分子段产物得到粗肽液;

(7)将粗肽液经层析分离,收集第一个峰对应的组份,然后经HPLC分离纯化,冷冻干燥,得到青蛤多肽。

2.根据权利要求1所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中的脉冲电场处理方法为:脉冲数为300~400次,电场强度15~25kV/cm,脉冲宽度为50~60μs,脉冲频率1500~2000Hz,浸泡液在低温保持时间为7~8小时。

3.根据权利要求1所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)中将浸泡液离心分离3~5次,然后去离子水洗涤3~5次并离心分离。

4.根据权利要求1所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中碱性蛋白酶液的酶解时间5~8小时,酶解温度为35~50℃,料液比1:3~6,pH值为7~10,酶加入量为2000~3500 U/g。

5.根据权利要求1或4所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中碱性蛋白酶液的酶解时间7小时,酶解温度为50℃,料液比1:6,pH值为9,酶加入量为3500 U/g。

6.根据权利要求1所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(7)中所用层析柱为聚葡糖层析柱Sephadex G25柱,洗脱波长280nm。

7.根据权利要求1所述的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(7)中HPLC所用色谱柱为Zorbax SB-C18色谱柱,色谱分离波长219nm。

8.根据权利要求1所的北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法,其特征在于,离心分离的温度为在0 4℃,离心转速10000~12000 r/min。

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