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专利号: 201910974680X
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种文蛤寡肽的制备方法,所述文蛤寡肽的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-Asp,其特征在于,包括以下步骤:(1)将新鲜的文蛤洗净后去壳,取内脏、置于水中搅拌浸泡去除杂质,然后将文蛤内脏调整至中性后匀浆处理制备成文蛤匀浆液;

(2)将文蛤匀浆液与复配溶剂按料液比1:2~4混合均匀获得浸泡液,所用复配溶剂为离子液体EMIMBF4与γ-丁内酯按体积比1:1混合制成;

(3)降低浸泡液温度至-50~-60℃的低温,向浸泡液中通入脉冲电场处理,然后升至室温;

(4)离心分离步骤(3)处理后的浸泡液并回收上清液,去离子水洗涤固体并离心分离得到内脏破碎物;

(5)向内脏破碎物中加入碱性蛋白酶溶液处理,然后灭酶活性,得到酶解液;

(6)将步骤(5)的酶解液离心分离,取上清液经滤膜过滤,然后经超滤膜处理,截留分子量小于5kDa的分子段产物得到粗肽液;

(7)将粗肽液层析分离,收集层析最高峰对应的组份,然后经HPLC分离纯化,收集色谱最高峰对应的组份,冷冻干燥,得到文蛤寡肽。

2.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中的脉冲电场处理方法为:脉冲数为200~300次,电场强度15~20kV/cm,脉冲宽度为50~70μs,脉冲频率

1000~1200Hz,浸泡液在低温保持时间为7~8小时。

3.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)中将浸泡液离心分离3~5次,然后去离子水洗涤3~5次并离心分离。

4.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中碱性蛋白酶液的酶解时间6~12小时、酶解温度40~55℃、料液比1:1~4、pH值为9~10.5、酶加入量为800~1400 U/g。

5.根据权利要求1或4所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(5)中碱性蛋白酶液的酶解时间8小时、酶解温度40℃、料液比1:2、pH值为9.5、酶加入量为1000 U/g。

6.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(7)中层析所用层析柱为聚葡糖层析柱Sephadex G25柱,洗脱波长280nm。

7.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,步骤(7)中HPLC所用色谱柱为Zorbax SB-C18色谱柱,色谱分离波长280nm。

8.根据权利要求1所述的文蛤寡肽的制备方法,其特征在于,离心分离的温度为0~4℃,离心转速为10000~12000r/min。