1.一种血清外泌体ssc-miR-92b-3p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用,其特征在于所述的血清外泌体ssc-miR-92b-3p的核苷酸序列如下所示:
5’-UAUUGCACUCGUCCCGGCCUCC-3’。
2.一种用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物,其特征在于包含引物ssc-miR-
92b-3p-F和引物ssc-miR-92b-3p-R,其核苷酸序列如下所示:引物ssc-miR-92b-3p-F:5’-GCTATTGCACTCGTCCCG-3’;
引物ssc-miR-92b-3p-R:5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’。
3.根据权利要求2所述的用于检测上述母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物,其特征在于还包含茎环法反转录引物ssc-miR-92b-3p_1,其核苷酸序列如下所示:引物ssc-miR-92b-3p_1:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGGAGGC-3’。
4.一种用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒,其特征在于包含权利要求2或3所述的引物。
5.根据权利要求4所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒,其特征在于还包含如下组分:2×TS Reaction Mix、RT/RI Enzyme Mix、gDNA Remover、RNase-free Water、Green qPCR SuperMix。
6.权利要求2或3所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物在制备母猪早期妊娠诊断产品中的应用。
7.权利要求4或5所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒在制备母猪早期妊娠诊断产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒在制备母猪早期妊娠诊断产品中的应用,其特征在于包含如下步骤:从待测母猪血清中提取外泌体,然后从外泌体中提取RNA,RNA反转录得到cDNA后进行荧光定量PCR。
9.根据权利要求8所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒在制备母猪早期妊娠诊断产品中的应用,其特征在于:所述的反转录的体系为:
所述的反转录的程序为:
将待测样品RNA、反转录引物与RNase-free Water混匀,65℃孵育5min后,冰浴2min;然后再加入其他反应组分,轻轻混匀,42℃孵育15min;最后85℃加热5秒,得到cDNA。
10.根据权利要求8所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的试剂盒在制备母猪早期妊娠诊断产品中的应用,其特征在于:所述的荧光定量PCR的体系为:
所述的荧光定量PCR的程序为:
94℃预变性30sec;94℃5sec,60℃30sec,40个循环;94℃15sec,60℃1min,94℃15sec。