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专利号: 2019110362730
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于鉴定方格星虫遗传性别的探针,其特征在于,探针包括引物F1:GCAGATTCTTCGGGTACTGTTC,引物R1:AGGAGAGATGGTTGTGGGACT。

2.一种用于鉴定方格星虫遗传性别的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)抽取方格星虫体腔液,用于提取mRNA;

(2)在体腔液中按1:5比例加入Trizol溶液,在4℃下离心;

(3)加入的氯仿,混匀,室温下静置;然后于4℃下离心;

(4)取上清,加入异丙醇,混匀,离心;

(5)弃上清,加入75%乙醇,混匀,离心;

(6)弃上清,在酒精灯附近将离心管晾干,晾干后加入水,溶解所获得的mRNA,使用Nanodrop1000定量,并进行琼脂糖凝胶电泳确定mRNA质量;

(7)使用cDNA合成试剂盒进行逆转录;

(8)采用权利要求1所述的引物F1和R1进行PCR扩增;

(9)PCR产物琼脂糖凝胶电泳:将PCR产物加入上样缓冲液,进行琼脂糖凝胶电泳,使用凝胶成像系统拍照并记录,扩增出现明显条带为雌性个体,而扩增不出条带的为雄性个体。

3.如权利要求2所述的一种用于鉴定方格星虫遗传性别的方法,其特征在于,所述PCR扩增体系如下:总体积20 μl

cDNA模板                        1 μlF1(10 pmol/μl)                  0.5 μlR1(10 pmol/μl)                  0.5 μl

2xTaq buffer mix(Vazyme)        10 μl无菌水                          15 μl,PCR反应程序为:95℃预变性30秒,95℃ 30秒,58℃ 30秒,72℃ 30秒,39个循环,72℃延伸2分钟。