1.一种用于鉴定方格星虫遗传性别的探针,其特征在于,探针包括引物F1:GCAGATTCTTCGGGTACTGTTC,引物R1:AGGAGAGATGGTTGTGGGACT。
2.一种用于鉴定方格星虫遗传性别的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)抽取方格星虫体腔液,用于提取mRNA;
(2)在体腔液中按1:5比例加入Trizol溶液,在4℃下离心;
(3)加入的氯仿,混匀,室温下静置;然后于4℃下离心;
(4)取上清,加入异丙醇,混匀,离心;
(5)弃上清,加入75%乙醇,混匀,离心;
(6)弃上清,在酒精灯附近将离心管晾干,晾干后加入水,溶解所获得的mRNA,使用Nanodrop1000定量,并进行琼脂糖凝胶电泳确定mRNA质量;
(7)使用cDNA合成试剂盒进行逆转录;
(8)采用权利要求1所述的引物F1和R1进行PCR扩增;
(9)PCR产物琼脂糖凝胶电泳:将PCR产物加入上样缓冲液,进行琼脂糖凝胶电泳,使用凝胶成像系统拍照并记录,扩增出现明显条带为雌性个体,而扩增不出条带的为雄性个体。
3.如权利要求2所述的一种用于鉴定方格星虫遗传性别的方法,其特征在于,所述PCR扩增体系如下:总体积20 μl
cDNA模板 1 μlF1(10 pmol/μl) 0.5 μlR1(10 pmol/μl) 0.5 μl
2xTaq buffer mix(Vazyme) 10 μl无菌水 15 μl,PCR反应程序为:95℃预变性30秒,95℃ 30秒,58℃ 30秒,72℃ 30秒,39个循环,72℃延伸2分钟。