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专利号: 201911045214X
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于由以下步骤组成:

(1)采集宰后的新鲜肉样品和不同冻融次数的冻融肉样品,提取新鲜肉样品和冻融肉样品中的蛋白,并将获得的蛋白酶解,获得样品中肽段;

(2)对步骤(1)获得的肽段进行iTRAQ标记,分离标记后的肽段,并进行生物质谱定性和定量分析,以定性后的肽段在冻融肉样品与新鲜肉样品中的相对定量值之比的对数值作为判断蛋白丰度水平变化的依据,该对数值大于1.5则蛋白上调,该对数值小于2/3则蛋白水平下调,该对数值处于1.5和2/3之间则该蛋白丰度在新鲜肉样品和冻融肉样品中无显著变化;

(3)利用维恩图对步骤(2)的结果进行分析,若对数值大于1.5或小于2/3,则该蛋白丰度在冻融肉样品与新鲜肉样品中的含量差异显著,将含量差异显著的蛋白作为标记蛋白;

(4)按照步骤(1)~(3)的方法检测不同待测肉样品中标记蛋白的含量,根据标记蛋白的含量判断待测肉样品的冻融程度,如果标记蛋白为正相关的标记蛋白,则标记蛋白含量越高说明待测肉样品冻融次数越多;如果标记蛋白为负相关的标记蛋白,则标记蛋白含量越低说明待测肉样品冻融次数越多。

2.根据权利要求1所述的基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于:

所述肉为羊肉时,标记蛋白为延伸因子1-γ、cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基α、核糖体蛋白S12及胶原蛋白α-2(IV)链,其中延伸因子1-γ、cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基α、40S核糖体蛋白S12为正相关的标记蛋白,胶原蛋白α-2(IV)链为负相关的标记蛋白。

3.根据权利要求2所述的基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于:

步骤中(1)中,提取羊肉中蛋白的方法为尿素法。

4.根据权利要求3所述的基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于:

步骤中(1)中,将获得的蛋白用胰蛋白酶在37℃下进行FASP酶切,获得肽段。

5.根据权利要求2所述的基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于:

步骤中(2)中,采用RP C18色谱柱对标记后的肽段进行分离,将分离后的肽段用流动相A溶解后上样到液质联用仪,进行梯度洗脱并进行质谱检测,其中流动相A为质量浓度为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为质量浓度为0.1%的甲酸乙腈溶液,流动相梯度选择0到37.5分钟A:B由97%:3%到84%:16%,37.5到48分钟A:B由75%:25%到70%:30%,48到54分钟A:B保持20%:80%,洗脱流速为300nL/min,检测质谱全扫描范围m/z 350~1600,母离子使用HCD方法碎裂。

6.根据权利要求1所述的基于iTRAQ标记蛋白评价肉类冻融程度的方法,其特征在于:

步骤中(2)中,生物质谱定性和定量分析的条件为:质谱原始数据基于Ovis蛋白数据库进行数据分析,并使用Proteome Discoverer软件按照Sequest算法进行搜库计算分析,选择低于1%FDR条件下高度可信的多肽作为蛋白质定性鉴定的过滤参数,选择特异性多肽用于不同样品间蛋白质的相对定量分析。