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专利号: 2019110662896
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.野葡萄VyPPR基因,其特征在于,核苷酸序列如SEQ: NO.1所示,编码序列全长为1874个核苷酸,开放阅读框为1590个核苷酸。

2.根据权利要求1所述的野葡萄VyPPR基因,其特征在于:该基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示,可编码一个含529个氨基酸的蛋白。

3.根据权利要求1或者2任一所述的野葡萄VyPPR基因植物过量表达载体构建的方法,其特征在于:具有方法如下:(1)将包含有VyPPR基因编码区在内的共1011 bp的ORF片段正确插入植物过量表达载体pCAMBIA2300-GFP上;

(2)根据前期克隆到的VyPPR基因ORF序列,根据pCAMBIA2300-GFP载体上的酶切位点,在引物VyPPR-ORF-F的5’端加上酶切位点XbaI和KpnI,GGGTCTAGAATGGCTCCTCCCCAAAATCAAC,

GGGGGTACCCTAGTACAGACTAATCAGACTC;

(3)以pMD18-T-VyPPR质粒为模板,用VyPPR-ORF-XbaI-F与VyPPR-ORF-KpnI-R进行扩增,回收目的条带后连接到pMD19-T克隆载体,连接、转化后筛选、验证,即得植物表达载体pCAMBIA2300-VyPPR。

4.根据权利要求1或者2任一所述的野葡萄VyPPR基因的编码蛋白在干旱胁迫中的应用,其特征在于:所述葡萄VyPPR基因在拟南芥中的过量表达的具体方法:(1)将含有重组植物表达载体的农杆菌划线培养在LB平板上划线,并置于培养箱中进行培养;

(2)将菌液转移至离心瓶或离心管中,转速为4000 rpm离心10 min,去除上清液收集菌体,并重悬于渗透缓冲液中;

(3)将去除果荚的南芥花浸入渗透液中,浸透结束后清理掉南芥花上多余的渗透缓冲液,将南芥花放入培养箱中继续培养,经过转化的拟南芥植株进行正常管理,待果荚现白色时进行收种子;

(4)对上述通过卡那霉素初步筛选得到的VyPPR转基因植株及野生型植株,进一步在DNA水平进行鉴定,采用改进的 SDS 微量提取法提取总DNA。

5.根据权利要求4所述的野葡萄VyPPR基因的编码蛋白在干旱胁迫中的应用,其特征在于:对转基因拟南芥植株的抗旱性鉴定。

6.根据权利要求4所述的野葡萄VyPPR基因的编码蛋白在干旱胁迫中的应用,其特征在于:对转基因拟南芥植株生理生化特性分析,所述生理生化特性分析包括失水率的测定、解质渗漏率的测定和叶绿素含量的测定。