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专利号: 2019110859137
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于钨酸铋的均相阳极光电化学检测黄曲霉毒素的方法,其特征在于:

a、Bi2WO6的制备:将20mL的硝酸铋溶液与20mL钨酸盐溶液混合并搅拌20分钟后,移入高压釜中,在一定温度下加热一定时间;自然冷却至室温后,用无水乙醇与蒸馏水交替洗涤产物,并在真空干燥箱中烘干过夜,得到粉末状产物;

b、Bi2WO6修饰ITO电极的制备:称取上述制备好的Bi2WO6粉末配制1mg/mL的悬浊液;在预先清洗处理过的ITO电极表面滴涂30μL的Bi2WO6悬浊液,40℃下烘干2小时备用;

c、生物识别及信号放大反应:在pH=7.5的Tris‑HCl缓冲中,将适配体探针与不同浓度的黄曲霉毒素溶液混合,37℃下震荡孵育1小时;加入锁式探针以及含有10mM MgCl2的pH=

7.5的40mM Tris‑HCl缓冲溶液,37℃下孵育1小时;然后,加入T4 DNA连接酶以及含有10mM MgCl2、0.5mMATP的pH=7.540mM Tris‑HCl缓冲溶液,在22℃下孵育1小时;接下来加入phi29 DNA聚合酶以及含有10mM MgCl2、50mM KCl、5mM (NH4)2SO4的pH=7.540mM Tris‑HCl‑6缓冲溶液和脱氧核糖核苷三磷酸,30℃下进行2小时的扩增反应;最后将5×10 M的信号分子加入到上述溶液中,37℃下反应30min;

d、光电流的测定:通过电流‑时间技术,将Bi2WO6修饰的ITO电极作为工作电极置于上述步骤c的反应液中,在相对于Ag/AgCl参比电极为0.2V的电压下,进行光电流测定。

2.根据权利要求1所述的一种基于钨酸铋的均相光电化学检测黄曲霉毒素的方法,其特征在于制备Bi2WO6时硝酸铋溶液与钨酸盐溶液物质的量浓度之比为2:1,采用的钨酸盐为钨酸铵或钨酸钠中的一种,反应温度为160‑180℃,反应时间为10‑16小时。

3.根据权利要求1所述的一种基于钨酸铋的均相光电化学检测黄曲霉毒素的方法,其特征在于生物识别及信号放大反应中采用的适配体碱基序列为5'–TGC ACG TGT TGT CTC TCT GTG TCT CGT GCT TTT TT–3';锁式探针碱基序列为5'–AAC AGA GAG ACA CCC ACC CAC CCA CCC ACA CAC AGA GCA CG–3'。

4.根据权利要求1所述的一种基于钨酸铋的均相光电化学检测黄曲霉毒素的方法,其特征在于生物识别及信号放大反应中使用的信号分子为亚甲基蓝或硫磺素T中的一种。