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专利号: 2019110862290
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种非标记均相阴极光电化学检测17ß‑雌二醇的方法,其特征在于:a、CuBi2O4半导体材料的制备:首先,将0.24 g的Bi(NO3)3·5H2O溶解于含有0.35 mL浓硝酸的10 mL去离子水中,充分搅拌;与5 mL 5 mmol/L的铜盐溶液混合之后,将7 mL的1.0 mol/L NaOH溶液缓慢滴入到混合液中至产生蓝绿色沉淀之后转移至反应釜中,120  °C的条件下反应一定时间;取出,离心洗涤并烘干备用;

b、CuBi2O4修饰ITO电极的制备:将所制得的CuBi2O4固体粉末配成1mg/mL的溶液,滴到经过预处理的ITO导电玻璃表面,经自然晾干后,可得到CuBi2O4修饰的ITO电极;

c、17ß‑雌二醇的测定:将不同浓度的17ß‑雌二醇以及5 μL 10 μmol/L 的序列为5′‑GCT TCC AGC TTA TTG AAT TAC ACG CAG AGG GTA GCG GCT CTG CGC ATT CAA TTG CTG CGC GCT GAA GCG CGG AAG CCC TCT GCG TGT AAT TCA ATA AGC TGG AAG C‑3′的17ß‑雌二醇适配体探针HP1与含有200 mmol/L NaCl,25 mmol/L KCl,10 mmol/L MgCl2以及5% 乙醇的pH = 8.0的0.1 mol/L Tris–HCl缓冲在室温条件下孵育20 min;然后加入3 μL 3.0 U/μL的核酸外切酶III和5 μL的10 × NEB buffer 1溶液,另外孵育20 min;接下来将上述溶液于80 °C条件下加热10分钟,使得核酸外切酶III失活;之后将含有1.8 μmol/L的序列为5′‑AGC CGC TAC CCT CTG CGT GTA ATT CAA TAA GCT GGA AGC CCC TCC CTC CCT CCC CTT CCG CGC TTC AGC GCG CAG CAA TTG AAT GCG CAG‑3′的锁式探针以及2 U/μL T4 DNA连接酶的连接反应溶液加入其中,室温条件下孵育1 h形成圆形模板;紧接着于30 °C条件下,在含有0.2 U/μL Phi29 DNA聚合酶,pH = 8.0的50 mmol/L Tris−HCl缓冲溶液中进行滚环扩增反应以产生较大量的、能够嵌入信号分子的G‑四联体DNA,为实现信号的获取与放大奠定基础;最后加入34 μL 90 μmol/L的信号分子,在室温下进一步孵育15 min,用CuBi2O4修饰的ITO电极作为工作电极,Ag/AgCl电极和铂丝分别作为参比电极和对电极,在pH = 8.0的0.1 mol/L Tris−HCl缓冲溶液中,电压相对于Ag/AgCl参比电极为‑0.2 V条件下实现光电流的测定。

2.根据权利要求1所述的一种非标记均相阴极光电化学检测17ß‑雌二醇的方法,其特征在于制备CuBi2O4阴极半导体材料用到的铜盐选自于CuSO4或Cu(NO3)2,反应时间为18−24 h。

3.根据权利要求1所述的一种非标记均相阴极光电化学检测17ß‑雌二醇的方法,其特征在于雌激素17ß‑雌二醇测定时所用的信号分子选自亚甲基蓝或氯化铁血红素。