1.一种非标记均相阴极光电化学检测17β-雌二醇的方法,其特征在于:
a、CuBi2O4半导体材料的制备:首先,将0.24g的Bi(NO3)3·5H2O溶解于含有0.35mL浓硝酸的10mL去离子水中,充分搅拌;与5mL 5mmol/L的铜盐溶液混合之后,将7mL的1.0mol/L NaOH溶液缓慢滴入到混合液中至产生蓝绿色沉淀之后转移至反应釜中,120℃的条件下反应一定时间;取出,离心洗涤并烘干备用;
b、CuBi2O4修饰ITO电极的制备:将所制得的CuBi2O4固体粉末配成1mg/mL的溶液,滴到经过预处理的ITO导电玻璃表面,经自然晾干后,可得到CuBi2O4修饰的ITO电极;
c、17β-雌二醇的测定:将不同浓度的17β-雌二醇以及5μL 10μmol/L 17β-雌二醇适配体探针HP1与含有200mmol/LNaCl,25mmol/LKCl,10mmol/LMgCl2以及5%乙醇的pH=8.0的
0.1mol/L Tris–HCl缓冲在室温条件下孵育20min;然后加入3μL 3.0U/μL的核酸外切酶III和5μL的10×NEB buffer 1溶液,另外孵育20min;接下来将上述溶液于80℃条件下加热10分钟,使得核酸外切酶III失活;之后将含有1.8μmol/L锁式探针以及2U/μL T4 DNA连接酶的连接反应溶液加入其中,室温条件下孵育1h形成圆形模板;紧接着于30℃条件下,在含有
0.2U/μL Phi29 DNA聚合酶,pH=8.0的50mmol/L Tris-HCl缓冲溶液中进行滚环扩增反应;
最后加入34μL 90μmol/L的信号分子,在室温下进一步孵育15min,用CuBi2O4修饰的ITO电极作为工作电极,Ag/AgCl电极和铂丝分别作为参比电极和对电极,在pH=8.0的0.1mol/LTris-HCl缓冲溶液中,电压相对于Ag/AgCl参比电极为-0.2V条件下实现光电流的测定。
2.根据权利要求1所述的一种非标记均相阴极光电化学检测17β-雌二醇的方法,其特征在于制备CuBi2O4阴极半导体材料用到的铜盐选自于CuSO4或Cu(NO3)2,反应时间为18-
24h。
3.根据权利要求1所述的一种非标记均相阴极光电化学检测17β-雌二醇的方法,其特征在于该方法检测目标物17β-雌二醇时用到的适配体探针HP1为:5′-GCT TCC AGC TTA TTG AAT TAC ACG CAG AGG GTA GCG GCT CTG CGC ATT CAA TTG CTG CGC GCT GAA GCG CGGAAG CCC TCT GCG TGTAAT TCAATAAGC TGGAAG C-3′;锁式探针为:5′-AGC CGC TAC CCT CTG CGT GTAATT CAATAAGCT GGAAGC CCC TCC CTC CCT CCC CTT CCG CGC TTCAGC GCG CAG CAATTGAAT GCG CAG-3′。
4.根据权利要求1所述的一种非标记均相阴极光电化学检测17β-雌二醇的方法,其特征在于雌激素17β-雌二醇测定时所用的信号分子选自亚甲基蓝或氯化铁血红素。