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专利号: 2019111403437
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于步骤如下:(1)芒果皮果胶溶液的制备:取芒果皮,洗净煮沸灭酶,酸浸,热水浸提后过滤得上清提取液,用乙醇沉淀,无水乙醇洗涤后抽滤,并冷冻干燥得到芒果皮果胶,并用醋酸钠缓冲液溶解芒果皮果胶配成果胶溶液;

(2)固定化聚半乳糖醛酸酶的制备:将聚半乳糖醛酸酶稀释10 50倍,得到稀释后的纯~酶溶液;在搅拌状态下按照纯酶溶液:质量体积比为2% 5%的聚乙烯醇溶液:0.1 1mol/L 的~ ~NaF溶液:去离子水的体积比为4 10:2:1:1 2加料,搅拌30 60min得均匀溶液;缓慢加入按~ ~ ~照体积比正辛基三乙氧硅烷:正硅酸四乙酯为1:2 5,加入正辛基三乙氧硅烷和正硅酸四乙~酯溶液,继续搅拌8 12h;离心倒出上清液,用去离子水洗涤若干次,得到固定化酶;

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(3)水解:取步骤(2)制备所得固定化酶,加入果胶溶液,固定化酶:果胶溶液质量体积比为1:1 10;随后在30 60℃、pH 3 7的条件下反应5 60min,反应离心后得到抑菌性的芒果~ ~ ~ ~皮果胶低聚糖。

2.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于步骤(1)中芒果皮果胶溶液的制备过程为:将芒果皮煮沸灭酶,40 60℃烘~干,粉碎过40 60目的筛;按照固液比为1:10 50加入水,用0.01 1mol/L的盐酸调节pH为2~ ~ ~ ~

5,放入温度为70 90℃的水浴锅内浸提1 5h后过滤,得到提取液;将所得提取液与体积浓度~ ~为95%的乙醇以1:1 3的体积比混合后搅拌均匀,在4℃环境中静置6 12h,过滤得到沉淀;将~ ~所得沉淀用无水乙醇洗涤2 3次,最后‑40 ‑60℃冷冻干燥48 72h得提取的芒果皮果胶;采~ ~ ~用醋酸钠缓冲液并配成质量浓度为0.1% 2%的芒果皮果胶溶液。

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3.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于:步骤(1)中芒果皮果胶的提取率为7% 15%。

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4.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于:步骤(2)最终在6000‑8000r/min离心5‑20min,倒出上清液,用去离子水洗涤三次以上,得固定化酶。

5.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于:步骤(2)中,聚乙烯醇溶液的体积浓度为4%;NaF溶液的浓度为1mol/L。

6.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于:步骤(2)中固定化酶中蛋白质负载率为60% 90%。

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7.根据权利要求1所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于步骤(3)水解后在5000‑10000r/min离心5‑30min,得到抑菌性的芒果皮果胶低聚糖。

8.根据权利要求7所述固定化聚半乳糖醛酸酶制备具有抑菌性的芒果皮果胶低聚糖的方法,其特征在于:所述抑菌性的芒果皮果胶低聚糖聚合度不同;所述固定化酶能够重复利用。