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专利号: 2019111454744
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:包括:

步骤1:按照皂苷元骨架结构差异分成三种不同类型,分别如下:

步骤2:根据上述皂苷元骨架结构,列出茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径,总结出油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征;

步骤3:对油茶籽油样品进行皂苷类化合物提取和检测,所述检测包括:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术,获取色谱信息和质谱信息,结合步骤2中的油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征,根据皂苷元骨架结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点,推测未知皂苷类化合物的结构。

2.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤2中,裂解特征包括:Camelliagenin B类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片451.32,计算出的化学式为C30H44O3;Camelliagenin A类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片

437.34,计算出的化学式为C30H46O2;Theasapogenol F类型的茶皂苷在二级质谱中特征碎片为497.32,计算出的化学式为C31H46O5。

3.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤2中,茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径包括:①苷元骨架烷基链基团丢失②糖基逐步丢失③糖基链与皂苷元分离。

4.根据权利要求3所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤2中,茶皂苷在质谱中有以下特征二级碎片:①苷元骨架烷基链基团丢失:茶皂苷中苷元骨架上的烷基链,包括Ang,Tig,MB,Isov,Hex或Butyryl,易丢失形成大于1100Da的特征碎片;

②糖基逐步丢失:对茶皂苷施加适当的碰撞电压,四个糖基均可能丢失,且每丢失一个糖基后可能形成两种碎片:其中一种是断裂处脱水形成双键,另一种是加氢形成羟基,两者相差18Da,该裂解规律可能形成7种碎片;

③糖基链与皂苷元分离:糖基除了一个一个丢失之外,也可能以糖基链,例如三个糖的形式整体丢失,形成451Da的特征碎片,其最外侧的糖为五碳糖;或481Da的特征碎片,其最外侧的糖为六碳糖的特征碎片。

5.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤3中,对油茶籽油样品进行油皂苷类化合物提取的方法,以2.5g油茶籽油样品为例,各试剂用量对应于2.5g油茶籽油样品,则油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为:准确称取

2.5g油茶籽油样品于离心管中,加入3-7mL正己烷,加入20-30mL乙醇水混合溶液,涡旋3-

7min,3000-4000rmp离心8-12min后收集下层,旋蒸干燥后加入8-12mL蒸馏水溶解,将提取液移至离心管中,加入8-12mL正丁醇,涡旋振荡2-5min后离心分离,重复2-4次,合并正丁醇提取液旋蒸至干,用甲醇水重溶得到提取液。

6.根据权利要求4所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤3中,油茶籽油皂苷类化合物提取的方法,以2.5g油茶籽油样品为例,各试剂用量对应于2.5g油茶籽油样品,则油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为:准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中,加入5mL正己烷,加入20-30mL乙醇水混合溶液,其中乙醇含量为65-85%,涡旋5min,3500rmp离心10min后收集下层,旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解,将提取液移至离心管中,加入10mL正丁醇,涡旋振荡3min后离心分离,重复3次,合并正丁醇提取液旋蒸至干,用250μl 50%甲醇水重溶得到提取液,提取液过孔径为0.2-0.3μm的滤膜,收集过滤液备用;其中%皆为体积分数。

7.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤3中,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术,其中:色谱条件为:色谱柱:Agilent Poroshell 120EC-C18,流动相A:0.1%甲酸水,流动相B:0.1%甲酸乙腈,梯度洗脱,流速:0.2-0.4mL/min,柱温:30±5℃,进样量:4±0.5μL;色谱条件中的%皆为体积分数;

质谱条件为:离子化模式:ESI-,干燥气温度300±10℃,干燥器流速7±2L/min,毛细管电压3.5±0.5kV,雾化器压力35±5psig,鞘气温度350±10℃,鞘气流速10±2L/min,碎裂电压120±10V,一级质谱碰撞电压45±5V,二级质谱碰撞电压65±5V,离子扫描范围m/z=

100-1500。

8.根据权利要求6所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:色谱条件为:色谱柱:Agilent Poroshell 120EC-C18(3.0mm×100mm,2.7μm),流动相A:0.1%甲酸水,流动相B:0.1%甲酸乙腈,梯度洗脱(0-2min,90%A,10%B;2-6min,90%A→65%A,

10%B→35%B;6-16min,65%A→35%A,35%B→65%B;16-18min,35%A→5%A,65%B→

95%B;18-19.9min,5%A,95%B;19.9-20min,5%A→90A,95%B→10%B),流速:0.3mL/min,柱温:30℃,进样量:4μL;色谱条件中的%皆为体积分数。

9.根据权利要求6所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:质谱条件为:离子化模式:ESI-,干燥气温度300℃,干燥器流速7L/min,毛细管电压3.5kV,雾化器压力35psig,鞘气温度350℃,鞘气流速10L/min,碎裂电压120V,一级质谱碰撞电压45V,二级质谱碰撞电压65V,离子扫描范围m/z=100-1500。

10.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法,其特征在于:所述步骤3中,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术,包括:利用Q-TOF/MS质谱分析器的四极杆选择色谱峰对应的分子离子,在碰撞池中对其进行碰撞诱导解离,裂解所得的碎片离子通过TOF扫描得到二级质谱图。