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专利号: 2019111455465
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:包括:步骤1:在非加热条件下采用有机溶剂快速提取油茶籽油皂苷类化合物,提取液过滤膜,收集过滤液备用;所述步骤1中,油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为:准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中,加入5mL正己烷,加入20‑30mL乙醇水混合溶液,乙醇含量为65‑

85%,涡旋3‑7min,3000‑4000rmp离心8‑12min后收集下层,旋蒸干燥后加入8‑12mL蒸馏水溶解,将提取液移至离心管中,加入8‑12mL正丁醇,涡旋振荡2‑5min后离心分离,重复2‑4次,合并正丁醇提取液旋蒸至干,用甲醇水重溶得到提取液;提取液过孔径为0.2‑0.3μm的滤膜,收集过滤液备用;

步骤2:将步骤1获得的过滤液送入高效液相色谱仪和高分辨飞行时间质谱仪,其中:色谱条件为:色谱柱:Agilent Poroshell 120EC‑C18,规格为3.0mm×100mm,2.7μm,流动相A:0.1%甲酸水,流动相B:0.1%甲酸乙腈,梯度洗脱,流速:0.3mL/min,柱温:30℃,进样量:4μL;色谱条件中的%皆为体积分数;所述梯度洗脱具体为:0‑2min,90%A,10%B;2‑

6min,90%A→65%A,10%B→35%B;6‑16min,65%A→35%A,35%B→65%B;16‑18min,

35%A→5%A,65%B→95%B;18‑19.9min,5%A,95%B;19.9‑20min,5%A→90A,95%B→

10%B;

质谱条件为:离子化模式:ESI ,干燥气温度300℃,干燥器流速7±2L/min,毛细管电压

3.5±0.5kV,雾化器压力35±5psig,鞘气温度350±10℃,鞘气流速10±2L/min,碎裂电压

120±10V,一级质谱碰撞电压45±5V,二级质谱碰撞电压65±5V,离子扫描范围m/z=100‑

1500;

步骤3:采用UHPLC‑Q‑TOF/MS对采集的数据进行分析,包括:收集现有技术中油茶籽中茶皂苷化合物的名称及分子式,并精确计算相对分子质量,利用MassHunter PCDL Manager软件建立含有茶皂苷化合物数据库;通过MassHunter定性软件结合皂苷类化合物数据库检索采集到的原始数据,得到提取液中含有的与茶皂苷化合物库中精确相对分子质量一致的色谱峰;利用Q‑TOF/MS质谱分析器的四极杆选择色谱峰对应的分子离子,在碰撞池中对其进行碰撞诱导解离,裂解所得的碎片离子通过TOF扫描得到二级质谱图;根据离子的裂解情况推断油茶籽油皂苷类化合物提取液中含有的茶皂苷种类及结构。

2.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:所述步骤1中,油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为:准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中,加入5mL正己烷,加入20‑30mL乙醇水混合溶液,其中乙醇含量为65‑85%,涡旋5min,3500rmp离心

10min后收集下层,旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解,将提取液移至离心管中,加入10mL正丁醇,涡旋振荡3min后离心分离,重复3次,合并正丁醇提取液旋蒸至干,用250μl 50%甲醇水重溶得到提取液,提取液过孔径为0.2‑0.3μm的滤膜,收集过滤液备用;上述%皆为体积分数。

3.根据权利要求2所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:所述步骤1中,油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为:准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中,加入5mL正己烷,加入25mL乙醇水混合溶液,其中乙醇含量为85%,涡旋5min,3500rmp离心10min后收集下层,旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解,将提取液移至离心管中,加入10mL正丁醇,涡旋振荡3min后离心分离,重复3次,合并正丁醇提取液旋蒸至干,用250μl 50%甲醇水重溶得到提取液,提取液过孔径为0.22μm的滤膜,收集过滤液备用;上述%皆为体积分数。

4.根据权利要求1‑3中任一项所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:所述步骤2中质谱条件为:离子化模式:ESI‑,干燥气温度300℃,干燥器流速7L/min,毛细管电压3.5kV,雾化器压力35psig,鞘气温度350℃,鞘气流速10L/min,碎裂电压120V,一级质谱碰撞电压45V,二级质谱碰撞电压65V,离子扫描范围m/z=100‑1500。

5.根据权利要求1‑3中任一项所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:所述步骤3中根据离子的裂解情况推断油茶籽油皂苷类化合物提取液中含有的茶皂苷种类及结构,方法为:根据已鉴定的茶皂苷结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点来对其结构进行合理推测。

6.根据权利要求5所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法,其特征在于:将未知化合物与已知茶皂苷进行比较,若除了最后代表糖基的451Da碎片外,两种茶皂苷在每个裂解阶段的碎片均相差2Da,推测未知化合物A的皂苷元上某个官能团比现有茶皂苷多两个氢,然后再根据茶皂苷元骨架上官能团分布特征对其进行合理替换;若糖基逐步丢失裂解过程中碎片相同,其余裂解过程糖基的碎片相差30Da,推测未知化合物B的糖基链上最外侧糖基为六碳糖;若R2基团裂解过程中碎片相差14Da,其余裂解过程碎片均相同,推测未知化合物C的R2基团多CH2,可能为丁酰基团;未见报道的化合物,基于已报道的茶皂苷结构及其裂解规律对进行合理推测。