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专利号: 2019112576344
申请人: 曲阜师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于左氧氟沙星的多通道质谱衍生试剂,其特征在于,所述试剂的结构式为:

 ;

所述R为CH3、CH2D、CHD2、CD3、13CD3、C2H5、C2H3D2、C2H2D3或C2D5。

2.一种如权利要求1所述的多通道质谱衍生试剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

a. 将1.5 g左氧氟沙星溶于100 mL色谱乙腈中,超声处理2分钟,加入10.038 g 碳酸氢铵、48.6 mmol CH3I、CH2DI、CHD2I、CD3I、13CD3I、C2H5Br、C2H3D2I、C2H2D3I或C2D5I,放入磁子后密封,在室温下搅拌150小时;

抽滤得到的固体在50 ℃的真空烘箱中干燥7-8h,得白色固体;

b. 取0.5 g 白色固体溶解在5 mL新蒸的氯化亚砜中,磁力搅拌,升温至80 ℃,回流4 h,减压蒸除氯化亚砜,冷却至室温,得到的红色固体即为CH3-LFC-Cl、CH2D-LFC-Cl、CHD2-LFC-Cl、CD3-LFC-Cl、13CD3-LFC-Cl、C2H5-LFC-Cl、C2H3D2-LFC-Cl、C2H2D3-LFC-Cl或C2D5-LFC-Cl;

C3H7-LFC-Cl的合成方法与上述9种质谱衍生试剂的合成过程相似,不同在于,a步骤中使用C3H7Br。

3.一种利用权利要求1或2所述的基于左氧氟沙星的多通道质谱衍生试剂检测神经鞘氨醇己三糖苷的方法,其特征在于,包括以下步骤:将9个基于左氧氟沙星的多通道质谱衍生试剂对目标物进行衍生反应:其中CH3-LFC-Cl与神经鞘氨醇己三糖苷(lyso-Gb3)的衍生物作为质谱定量的内标物,其余8个衍生试剂CH2D/CHD2/CD3/13CD3/C2H5/C2H3D2/C2H2D3/C2D5-LFC-Cl分别标记8个实际样品;C3H7-LFC-Cl与lyso-Gb3的合成产物作为虚拟模板用于磁性表面分子印迹材料的合成,利用虚拟磁性表面分子印迹材料对上述9个衍生物进行萃取,洗脱液经滤膜过滤后联合超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

a. 标记衍生化过程:取50 µL标准品溶液或待测样品,加入含有200 µL pH 8.5-10.5硼酸钠缓冲溶液的离心管中,分别注入200 µL 55-70 µM的CH3/CH2D/CHD2/CD3/13CD3/C2H5/C2H3D2/C2H2D3/C2D5-LFC-Cl进行标记衍生,其中CH3-LFC-Cl与lyso-Gb3的衍生物作为内标物,摇匀后密封,在温度37-40 ℃水浴中超声波振荡反应1-4分钟;

b. 萃取过程:从上述9份样品中各吸取100 µL溶液于离心管中均匀混合,加入200 µL pH 7.5-9的硼酸钠缓冲溶液、8-15 mg虚拟磁性表面分子印迹材料,摇匀后密封,在室温下剧烈震荡10-20分钟,最后用外部磁铁实现分离,加入200 µL解吸附溶液进行洗脱2-4分钟;

c. 将步骤b中的洗脱液经滤膜过滤后定容至200 µL后利用超高效液相色谱三重四极杆质谱系统进行定量分析检测。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述虚拟磁性表面分子印迹材料通过以下方法制备而成:a. 1 g 六水合三氯化铁,2 g无水乙酸钠和6.5 g 1,6-己二胺在剧烈搅拌下依次分散在30 mL乙二醇中,室温下连续搅拌30分钟;

将上述溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 ℃反应24小时;

所得产物用水和乙醇各洗三次,60 ℃下真空干燥24小时,得到的黑色固体为Fe3O4@NH2;

b. 100 mg Fe3O4@NH2,200 mg 4-甲酰基苯硼酸和250 mg 氰基硼氢化钠分散在25 mL无水甲醇中,超声处理20分钟,65 ℃下回流24小时,水和甲醇各洗三次,60 ℃下真空干燥

24小时,得到的黑色固体为Fe3O4@NH2@FPBA;

c. 0.4 mg lyso-Gb3,10 mL二氯甲烷和20 μL吡啶在冰浴中均匀混合,0.3587 mg C3H7-LFC-Cl溶解于10 mL二氯甲烷中,倒入恒压漏斗, 缓慢滴加到反应瓶中,2小时后移开冰浴,室温下继续搅拌2小时,添加5 mL pH 9.5的碳酸钠缓冲液反应0.5小时,过滤以获得固体产物:C3H7-LFC-Cl-lyso-Gb3;

d. 0.6 mg C3H7-LFC-Cl-lyso-Gb3、50 mg Fe3O4@NH2@FPBA溶解于20 mL 20 mM pH 8的磷酸盐缓冲液中;

25 ℃搅拌1小时,用磷酸盐缓冲液漂洗两次,水和乙醇洗两次,60 ℃下真空干燥24小时;

10 mL乙腈做溶剂溶解前产物,加入0.1422 mg丙烯酰胺,超声15 min,暗处理12 h;

1.9822 mg乙二醇二甲基丙烯酸酯和0.1 mg偶氮二异丁腈均匀分散在预聚合溶液中,超声15 min,加入70 mL乙腈,氮气净化,机械搅拌下60 ℃反应8 h,75-80 ℃反应2 h,在外磁铁作用下分离,水和乙醇各洗三次,60 ℃下真空干燥24 h,80 ℃索式提取24 h除模板,水和乙醇各洗三次, 60 ℃真空干燥24 h,得到的固体粉末为虚拟磁性表面分子印迹聚合物。

6.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于,所述解吸附溶液为乙腈,甲醇,乙醇,丙酮,0.01%-0.20%甲酸的甲醇/H2O (v/v, 1:1)溶液。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述解吸附溶液为0.1%甲酸的甲醇/H2O (v/v, 1:1)溶液。

8.根据权利要求3-7任一项所述的方法,其特征在于,所述超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统中色谱分离使用安捷伦SB C18色谱柱:2.1 mm × 50 mm,1.8 µm,进样体积为2 µL,柱温30 ℃,采用梯度洗脱法。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述梯度洗脱法,时间为2.0 min,流速为

0.2 mL/min,流动相A为5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸,流动相B为乙腈含有0.1%甲酸,0 min流动相组成为40%A+60%B,0.5 min时15%A+85%B,1.5 min时8%A+92%B,1.6 min时2%A+98%B,

2.0 min时0%A+100%B;所述流动相中各分数均为体积分数。

10.根据权利要求8或9所述的方法,其特征在于,所述超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测时的质谱的条件为:干燥气温度300 ℃,流速10 L/min,喷雾器气压

40 psi,鞘气温度280 ℃,流速11 L/min,毛细管电压3.5 kV。