1.一种华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,所述华中枸骨叶总黄酮纯化方法包括以下步骤:
步骤一,利用乙醇对华中枸骨叶进行提取得乙醇总提取物;具体包括:取华中枸骨叶
10.0 kg,粉碎,80%的乙醇40 L冷浸提取3次,每次 48 h,合并提取液,减压回收乙醇至无醇味,低温真空干燥,得乙醇总提取物 861.0g;
步骤二,称取华中枸骨叶乙醇总提取物干燥粉末,进行石油醚脱脂,得总黄酮干燥粗粉;
具体包括:以蒸馏水充分分散所述华中枸骨叶乙醇总提取物干燥粉末5.0 g,置于250 mL分液漏斗中,以等量的石油醚萃取3次,弃石油醚层,将水层减压回收多量的水,低温真空干燥,得总黄酮干燥粗粉;
步骤三,利用大孔吸附树脂对总黄酮干燥粗粉进行吸附洗脱;
具体包括:取D101大孔吸附树脂并对所述D101大孔吸附树脂进行预处理,称取预处理好的D101大孔吸附树脂各250 g,装入色谱柱中,柱体积约 300mL,径高比为1:8;取步骤二中得到的总黄酮干燥粗粉5.0g,用多量的水充分分散溶解,大孔吸附树脂柱色谱反复吸附,水洗脱至流出液近无色,用50%的乙醇洗脱5 BV;
所述D101大孔吸附树脂预处理方法具体包括:用95%乙醇浸泡24小时,充分溶胀后,湿法装柱,继续用 95%乙醇冲柱,断检查流出液,至与水混合不呈白色浑浊为止,以蒸馏水洗至无醇味,pH 值为7;
步骤四,再经凝胶sephdex LH‑20色谱纯化;
具体包括葡聚糖凝胶 Sephadex LH‑20 纯化,取经D101大孔吸附树脂优化工艺纯化的总黄酮干粉,用水溶解,经葡聚糖凝胶 Sephadex LH‑20 色谱柱,甲醇进行洗脱,以1/3柱体积为1个流分,收集各个流分依次进行编号,并依次进行盐酸镁粉反应,待反应呈阴性时停止收集,确定甲醇洗脱量为3个柱体积,收集3 BV甲醇洗脱液;
步骤五,浓缩、真空干燥得干燥粉末即得纯化后的华中枸骨叶总黄酮;
步骤五得总黄酮干燥粉末后,还需测定干粉质量及总黄酮的量,计算总黄酮含量以及转移率。