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专利号: 2019113949262
申请人: 山西医科大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种血液mRNA检测试剂盒,包含SEQ ID NO.1~18所示的9对特异性多重PCR引物对,以及SEQ ID NO.19~34所示的16条SNP单碱基延伸引物,用于检测以下16个SNP分子标记:rs3753058、rs3753059、rs1793174、rs2304871、rs17121881、rs229587、rs77806、rs1626923、rs1741487、rs184528、rs1741488、rs7682260、rs7687256、rs7658293、rs4867、rs229586。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒,所述SEQ ID NO.1~18所示的9对特异性多重PCR引物对分别对应扩增以下所述的SNP分子标记:rs3753058、rs3753059的PCR引物对为序列SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物;

rs1793174的PCR引物对为序列SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物;

rs2304871的PCR引物对为序列SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物;

rs17121881的PCR引物对为序列SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物;

rs229586、rs229587的PCR引物对为序列SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物;

rs77806的PCR引物对为序列SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物;

rs1626923的PCR引物对为序列SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物;

rs1741487、rs184528、rs1741488的PCR引物对为序列SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物;

rs7682260、rs7687256、rs7658293、rs4867的PCR引物对为序列SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQ ID NO.18所示的下游引物。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒,所述SEQ ID NO. 19~34所示的16条SNP单碱基延伸引物分别对应延伸以下所述的SNP分子标记:rs3753058对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.19;rs3753059对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.20;rs1793174对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.21;rs2304871对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.22;rs17121881对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.23;rs229587对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.24;rs77806对应的延伸引物序列为SEQ ID  NO.25;

rs1626923对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.26;rs1741487对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.27;rs184528对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.28;rs1741488对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.29;rs7682260对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.30;rs7687256对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.31;rs7658293对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.32;rs4867对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.33;rs229586对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.34。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征是每对特异性多重PCR引物的扩增产物中至少包含1个血液特异性mRNA分子上的SNP,最多包含4个。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征是mRNA上的16个SNP分子标记分别来源于

5个血液特异性基因:SPTB、GYPA、CD3G、ANK1、AMICA1。

6.权利要求1所述检测试剂盒用于非疾病诊断的检测方法,包括以下步骤:

1)提取待测样本RNA作为模板,反转录为cDNA,利用所述SEQ ID NO.1~18所示的9对特异性多重PCR引物对,通过多重PCR得到扩增产物;

2)对扩增产物进行纯化处理,利用所述SEQ ID NO.19~34所示的16条SNP单碱基延伸引物,通过单碱基延伸体系得到延伸产物;

3)对延伸产物进行纯化处理,利用毛细管电泳、DNA测序仪和基因分析软件进行分析。