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专利号: 2020100320556
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酰胺酶突变体,其特征在于,所述酰胺酶突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位、402位或403位进行单位点突变或多位点突变获得,其中,单位点突变的酰胺酶突变体为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位丙氨酸突变成缬氨酸或苏氨酸、或第402位的缬氨酸突变成亮氨酸、或第403位的亮氨酸突变成缬氨酸或苏氨酸;

多位点突变的酰胺酶突变体为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位的丙氨酸突变成苏氨酸且第403位的亮氨酸突变为缬氨酸、或第378位的丙氨酸突变成苏氨酸且第402位的缬氨酸突变为亮氨酸、或第378位的丙氨酸突变成缬氨酸且第402位的缬氨酸突变为亮氨酸、或第378位的丙氨酸突变成缬氨酸且第403位的亮氨酸突变为缬氨酸、或第378位的丙氨酸突变成缬氨酸且第402位的缬氨酸突变为亮氨酸且第403位的亮氨酸突变为缬氨酸。

2.一种编码如权利要求1所述的酰胺酶突变体的编码基因。

3.一种包含如权利要求2所述的编码基因的重组基因工程菌。

4.如权利要求1所述的酰胺酶突变体在催化2‑氯烟酰胺制备2‑氯烟酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,包括:以包含酰胺酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养后获得的湿菌体或者湿菌体破碎后提取的酶作为生物催化剂,以2‑氯烟酰胺为底物,以pH为7.5~8.5的缓冲液为反应介质,30~60℃、150~500r/min条件下进行转化反应,反应结束后取反应液分离纯化,获得2‑氯烟酸。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,反应体系中,底物的初始浓度为50~300mM,每隔10~60min进行补料至终浓度50~200mM。

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于,反应体系中,催化剂的用量以菌体干重计为

0.25~2.5g/L。

8.如权利要求5所述的应用,其特征在于,反应介质为pH值为8.0的Tris‑HCl缓冲液,反应温度为40℃。