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专利号: 202010059578X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种同时检测发酵液中L-高丝氨酸和游离氨基酸的HPLC方法,其特征在于先对发酵液样品进行预处理,接着采用DEEMM衍生化试剂对发酵液样品进行衍生化处理之后,再通过高效液相色谱和通用型C18色谱柱对发酵液中的L-高丝氨酸和其他游离氨基酸进行分离和测定;

所述预处理方法为:取发酵液样品于离心管中,10000~12000r/min离心2~3min,收集上清液,用于下一步衍生化;

所述衍生化处理方法为:将上清液稀释5~10倍取稀释液,加入硼酸盐缓冲液和0.5%的DEEMM甲醇溶液,温度60~70℃下衍生化1~2h后,用0.22μm有机滤膜过滤,所得滤液进行下一步分离和测定;每200μL稀释液加入350μL的硼酸盐缓冲液和150μL的0.5%DEEMM甲醇溶液。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述检测为定量检测,先配制梯度浓度目标物质标准品,按照相应方法进行预处理、衍生化和高效液相色谱检测后,以色谱峰峰面积为横坐标、标准品浓度为纵坐标绘制标准曲线,测得待测样品中目标物质色谱峰面积后,对照标准曲线获得待测样品中目标物质的浓度值。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述高效液相色谱检测条件为:检测仪器:AgilentTechnologies1260InfinityⅡ高效液相色谱系统;

色谱柱:J&KScientificHPLCC-18Column(4.6×250mm,5μm);

流动相:流动相A为色谱级甲醇;流动相B为25mmol/L乙酸铵溶液,A:B=40%:60%,流速0.6mL/min;

柱温:25℃;

检测波长:250nm。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述硼酸缓冲液按如下方法配制:称取6.183g硼酸,加入70mL超纯水溶解,用1mol/L的NaOH溶液调pH至9.0,加超纯水定容至100mL。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述DEEMM甲醇溶液按如下方法配制:吸取

0.5mLDEEMM于100mL容量瓶中,用色谱级甲醇定容至100mL。