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专利号: 2020101496118
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.小麦全蚀病菌禾顶囊壳LAMP检测引物组在小麦全蚀病菌禾顶囊壳检测方面的应用,其特征在于:所述LAMP引物组包括四条特异性引物,具体如下:QS‑FIP:CAGGGTTTGTAACCTCCGGCACATACCTTTACTGTTGCTTC;

QS‑BIP:AACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTACTTATCGCATTTCGCTG;

QS‑F3:AAACTCCAACCCCTGTGA;

QS‑B3:ACTGAATTCTGCAATTCACA;

所述四条特异引物的靶标基因为小麦全蚀病菌禾顶囊壳的ITS。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述检测的方法,包括以下步骤:步骤一、提取基因组DNA:选取小麦植株的发病部位,提取基因组DNA,测定提取的基因组DNA的浓度和纯度,作为模板DNA,备用;

步骤二、确定反应体系:每25μL反应体系中,由以下成分组成:2.5 μL 10×ThermoPol Buffer,1.5 μL 100 mM MgSO4、3.5 μL 10 mM dNTPs、10 μM QS‑FIP和QS‑BIP各4 μL、10 μM QS‑F3和QS‑B3各0.5 μL、1μL 8000U/mL Bst DNA Polymerase和1μL模板DNA,灭菌超纯水补足25 μL;

步骤三、执行反应程序:将步骤二中所述反应体系中的试剂混均匀后,置恒温64℃水浴锅中反应60 min,然后向反应体系中加入 1μL核酸染料SYBR Green I,混匀后观察反应体系颜色的变化,在波长440~485 nm照射下,阳性为荧光黄绿色,阴性为橙色。