1.一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述方法为先将毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体破碎,收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液;将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;
或者,所述方法为先将毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体破碎,收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液;将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液进行分离,得到亚油酸异构酶;将亚油酸异构酶添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;
或者,所述方法为先将毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;用缓冲液重悬菌体,得到反应体系;将亚油酸添加至反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;
或者,所述方法为先将毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;
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所述毕赤酵母工程菌以毕赤酵母PichiaPink Strain 2为宿主表达氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的亚油酸异构酶;
所述毕赤酵母工程菌以pPink‑HC‑3CZHEK质粒为表达载体;所述pPink‑HC‑3CZHEK质粒是通过将去除α‑factor后的pPinkα‑HC质粒与核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的3CZHEK基因相连获得的。
2.如权利要求1所述的一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述发酵的温度为25
35℃、转速为150 250 rpm。
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3.如权利要求1或2所述的一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述反应的温度为30 45℃、转速为150 250 rpm。
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4.权利要求1 3任一所述的方法在生产共轭亚油酸方面的应用。
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