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专利号: 2020102062031
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种毕赤酵母工程菌,其特征在于,所述毕赤酵母工程菌以毕赤酵母为宿主表达编码亚油酸异构酶的基因;所述亚油酸异构酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的一种毕赤酵母工程菌,其特征在于,所述毕赤酵母为毕赤酵母PichiaPinkTM Strain 2。

3.如权利要求1或2所述的一种毕赤酵母工程菌,其特征在于,所述编码亚油酸异构酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

4.如权利要求1-3任一所述的一种毕赤酵母工程菌,其特征在于,所述毕赤酵母工程菌以PichiapPink-HC-3CZHEK质粒为表达载体;所述PichiapPink-HC-3CZHEK质粒是通过将去除α-factor后的pPinkα-HC质粒与3CZHEK基因相连获得的。

5.一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述方法为先将权利要求1-4任一所述的毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体破碎,收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液;将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;

或者,所述方法为先将上述毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体破碎,收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液;将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液进行分离,得到亚油酸异构酶;将亚油酸异构酶添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;

或者,所述方法为先将权利要求1-4任一所述的毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;用缓冲液重悬菌体,得到反应体系;将亚油酸添加至反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸;

或者,所述方法为先将权利要求1-4任一所述的毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;将菌体添加至含亚油酸的反应体系中进行反应,得到反应液;将反应液进行分离,得到共轭亚油酸。

6.如权利要求5所述的一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述发酵的温度为25~35℃、转速为150~250rpm。

7.如权利要求5或6所述的一种生产共轭亚油酸的方法,其特征在于,所述反应的温度为30~45℃、转速为150~250rpm。

8.权利要求1-4任一所述毕赤酵母工程菌或权利要求5-7任一所述的方法在生产共轭亚油酸方面的应用。

9.一种生产亚油酸异构酶的方法,其特征在于,所述方法为先将权利要求1-4任一所述的毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集菌体;

将菌体破碎,收集细胞破碎上清液;将细胞破碎上清液进行分离,得到氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的亚油酸异构酶。

10.权利要求1-4任一所述毕赤酵母工程菌或权利要求9所述的方法在生产亚油酸异构酶方面的应用。