1.用于降低啤酒非生物性浑浊的热稳定性β-1,3-1,4-葡聚糖酶，其特征在于，所述酶氨基酸序列(Beta-1,3-1,4-glucanase,GenBank:AFD54461.1)在第158位、第160位、第253位上发生突变，由原来的A、S、S分别突变为R、P、G，构建方法包括以下步骤：

1)从NCBI上获得β-1,3-1,4-葡聚糖酶序列(Beta-1,3-1,4-glucanase,GenBank:AFD54461.1)，交生物公司合成，采用EcoRⅠ酶切pET20b(+)质粒，设计PCR引物F:GACGGAGCTCGAATTGCAGAGCATTAACTTCAT，R:ATTCGGATCCGAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT，PCR反应结束后，加20μl Cloning Enhancer到PCR体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，将pET20b(+)质粒用EcoRⅠ酶切线性化，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的PCR产物与纯化的线性载体混合均匀，加入In-Fusion酶，50℃反应15min，转化E.coli JM109，挑取阳性克隆，送生物公司测序，将鉴定正确的质粒转化宿主E.coli BL21进行表达，得到含有野生型序列质粒的基因工程菌；

2)质粒DNA的提取

将携带有质粒pET20b(+)/CmChi1的E.coli BL21基因工程菌接种于LB/Amp(Amp终浓度

100μg/ml)液体培养基中，于37℃，200r/min过夜培养后，使用质粒小量提取试剂盒抽提质粒，具体操作按照说明书进行；

3)易错PCR扩增与突变文库的构建

以步骤二获得的质粒为模板，用NotⅠ酶切使质粒线性化，设计引物CmChi1-F：CAAGCTTGTCGACGGGACGGAGCTCGAATTGCAGA和CmChi-R:TCGGATCCGAATTCGTTCGGATCCGAATTTTTTTTTTTTT，进行易错PCR扩增基因，易错PCR扩增体系(50μl)为10×TaKaRa Taq Buffer，dNTPs Mixture，引物各0.2μmol/L，模板DNA 200ng，Taq DNA聚合酶2.5U，5mmol/l Mn2+，0.5U/μl的Taq DNA聚合酶2.5μl，7mmo l/l的Mg2+,PCR反应条件：95℃5min，94℃1min，55℃1min，72℃

2min，35个循环，72℃10min，加20μl Cloning Enhancer到PCR体系中，37℃孵育15min，80℃孵育15min，将pET20b(+)质粒用NotⅠ酶切线性化，酶切产物经过0.75％琼脂糖凝胶电泳后回收，溶于灭菌双蒸水中，将孵育后的PCR产物与纯化的线性载体混合均匀，加入I n-Fusion酶，50℃反应15min，转化E.coli BL21，涂布于固体LB平板(100μg/ml A mp)抗性筛选阳性转化子，所有转化子构成突变体文库；

4)突变文库的高通量筛选

将步骤三得到的转化后的菌液均匀地涂在预先涂有4μl IPTG(5mg/ml)直径为9mm含有氨苄青霉素的LB平板上，涂抹的转化液用量以最终每个平板大约长出50个单菌落为宜，37℃培养15h左右，再于4℃下放置1-2h，然后将无菌尼龙膜完全浸湿，立即以平稳的一次性动作将尼龙膜从琼脂面上揭下，将尼龙膜的菌落面向上，置于一块新的LB平板上(预先涂有4μl 5mg/ml IPTG)，37℃下培养4-5h后进行菌落的裂解处理，用细胞壁裂解液(25mmol/l Tris-HCl pH8.0,内含1mg/ml溶菌酶和1mmol/l EDTA pH8.0)、细胞膜裂解液(10mmol/l Tris-HCl pH8.0,内含0.1％(w/v)Triton-x-100)和平衡缓冲液(50mmol/l Tris-HCl pH8.0)分别浸泡3张滤纸，取出后放在干净的培养皿内，用玻棒赶去多余液体以防止菌落被冲散，将尼龙膜正面向上按细胞壁裂解液、细胞膜裂解液、平衡缓冲液的顺序依次置于3张滤纸上于室温分别处理30min，将上述处理好的尼龙膜菌落面向下铺于筛选平板(2％琼脂粉，0.5％羧甲基纤维素CMC，0.1mol/l pH6.6咪唑-邻苯二钾酸氢钾缓冲液)上，70℃反应

3h，揭去尼龙膜后，在筛选平板上加入适量1mol/l NaCl脱色15min，与尼龙膜上对应的有活性的克隆子周围会出现明显的透明圈；将透明圈比野生型对照大的突变子，挑出后复筛；

5)将复筛通过的阳性克隆，送生物公司测序；

6)突变体的生产，将步骤五的含有突变质粒的E.coli BL21发酵培养；

7)突变体的纯化，采用分子筛的方法纯化突变体；

8)对突变体进行SDS-PAGE电泳；

9)采用Bradford测定蛋白质浓度。

2.根据权利要求1所述的用于降低啤酒非生物性浑浊的热稳定性β-1,3-1,4-葡聚糖酶，其特征在于，所述酶用于降低啤酒非生物性浑浊。