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专利号: 2020102247288
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,所述蛋白分子为Anti‑RNA polymerase Ⅱ CTD repeat YSPTSPS(phospho S5),所述蛋白分子是RNA聚合酶Ⅱ中最大亚基的羧基末端结构域,所述应用包括采用蛋白分子作为标记分子对不同发育状态鱼类生殖细胞染色体进行免疫荧光定位分析;

其中,所述不同发育状态鱼类为不同发育时期的鲫鲤品系杂交鱼类及其原始亲本。

2.如权利要求1所述蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,所述鲫鲤品系杂交鱼类及原始亲本分别为红鲫、杂交鱼鲫鲤F1或异源四倍体鲫鲤中至少一种。

3.如权利要求1所述蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,所述免疫荧光定位分析包括以下步骤:S1.制备鱼性腺染色体;

S2.在低温下,加入500µL 4%多聚甲醛固定相关细胞及染色体20min,使用1×PBS重复清洗3次,每次5min;

S3.常温下,在200µL 0.5%Triton‑x‑100溶液中通透30min,使用1×PBS重复清洗3次,每次5min;

S4.置于50µL 3%牛血清白蛋白溶液中,在37℃下孵育60min;

S5.加入一抗CTD稀释液50µL,在湿盒中孵育,4℃下过夜,然后使用1×PBS重复清洗3次,每次10min;

S6.加入二抗稀释液50µL,在37℃下孵育60min,然后在避光条件下,使用1×PBS重复清洗3次,每次10min;

S7.加DAPI染液30µL,封片后在荧光显微镜下观察。

4.如权利要求3所述蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,步3

骤S1中,所述制备鱼性腺染色体的方法为:选取90 100mm实验鱼精巢组织用弯剪剪碎,带~

2mL生理盐水吸入离心管,轻轻吹打50次以上,再吸入8mL生理盐水混悬,静置3分钟后,吸取上清液转入另一离心管,在转速1000rpm下离心5min,弃上清;加入10mL 0.075MKcl,低渗3小时,卡诺氏固定液固定3次。

5.如权利要求3所述蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,步骤S5中,所述一抗CTD稀释液的稀释比例为1:50 1000。

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6.如权利要求3所述蛋白分子标记在鱼类生殖细胞发育研究中的应用,其特征在于,步骤S6中,所述二抗稀释液的稀释比例为1:50 200。

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