1.一种香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)香菇多酚氧化酶粗酶液的提取

取新鲜香菇和添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液匀浆，浸提5～25min，离心所得上清液即为香菇多酚氧化酶粗酶液A，整个过程在0～4℃下进行；

新鲜香菇和添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的料液比(g·mL-1)为1:1～1:5，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的pH为6～8.5，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液中PVP的添加量为10～

18％；

(2)粗酶液硫酸铵分级沉淀

第一步，向粗酶液A中加入硫酸铵搅拌至硫酸铵全部溶解，使得粗酶液A中硫酸铵饱和度为20～50％，静置后离心，整个过程在0～4℃下进行，离心后的上清液即为香菇多酚氧化酶提取液B；

第二步，向提取液B中加入硫酸铵搅拌至硫酸铵全部溶解，使得提取液B中硫酸铵饱和度为60～90％，静置后离心，弃去上清液，收集析出的沉淀和油状漂浮物，整个过程在0～4℃下进行，用pH为6～8.5的磷酸盐缓冲液溶解收集的沉淀和油状漂浮物，即得香菇多酚氧化酶提取液C；

(3)酶提取液的透析处理

将提取液C加入预处理好的透析袋中，封闭透析袋，将封闭好的透析袋彻底浸没于pH为

6～8.5的磷酸盐缓冲液中，静置，适时更换缓冲液，直至用BaCl2溶液检测透析外液无沉淀，从透析袋中转移出液体，得香菇多酚氧化酶提取液D，整个过程在0～4℃下进行；

(4)酶提取液的层析纯化

离子交换层析：向经过磷酸盐缓冲液平衡的离子交换树脂柱中加入酶提取液D，静置，分别用0.1～0.5mol·L-1的NaCl溶液从低浓度到高浓度进行梯度洗脱，整个过程在0～4℃下进行；采集活性峰邻近的酶液，即得香菇多酚氧化酶提取液E；

凝胶层析：将提取液E加入经过磷酸盐缓冲液平衡的凝胶层析柱，用缓冲液洗脱，整个过程在0～4℃下进行，收集活性峰附近的酶液，即得香菇多酚氧化酶提取液F。

2.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：离子交换树脂柱为DEAE纤维素DE-52，或/和凝胶柱为交联葡聚糖Sephadex G-100。

3.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：活性峰经由紫外分光光度计测定OD280确定。

4.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：新鲜香菇和添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的料液比(g·mL-1)为1:1～1:3，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的pH为6.5～7.5，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液中PVP的添加量为12～16％，浸提时间为10～15min。

5.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：新鲜香菇和添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的料液比(g·mL-1)为1:2～1:3，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液的pH为7～7.5，添加有PVP的磷酸盐混合缓冲液中PVP的添加量为12～14％，浸提时间为

10～15min。

6.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：粗酶液硫酸铵分级沉淀第一步在1～4℃下进行，粗酶液A中硫酸铵饱和度为30％～40％；粗酶液硫酸铵分级沉淀第二步在1～4℃下进行，提取液B中硫酸铵饱和度为60～70％。

7.根据权利要求1所述的香菇多酚氧化酶的提取纯化方法，其特征在于：离子交换层析：向经过磷酸盐缓冲液平衡的离子交换树脂柱中加入酶提取液D，静置，分别用0.1～

0.5mol·L-1的NaCl溶液从低浓度到高浓度进行梯度洗脱，整个过程在1～4℃下进行；采集活性峰邻近的酶液，为香菇多酚氧化酶提取液E；凝胶层析：将提取液E加入经过磷酸盐缓冲液平衡的凝胶层析柱，用缓冲液洗脱，整个过程在1～4℃下进行，收集活性峰附近的酶液，即得香菇多酚氧化酶提取液F。

8.根据权利要求1～7任一权利要求所述的方法得到的香菇多酚氧化酶。

9.根据权利要求1～7任一权利要求所述的方法得到的香菇多酚氧化酶作为多酚氧化酶标准品的应用。