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专利号: 2020102555166
申请人: 安徽科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种乳腺癌检测胶体金侧向层析试纸条,所述胶体金侧向层析试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫和吸收垫;所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘附在所述PVC底板上并采用搭接的方式连接;其特征在于,以硝酸纤维素长边为行,所述T1线、T2线、T3线、T4线、C1线和C2线呈2行3列分布;所述C1线和C2线分列两行,分布于每行的靠近吸收垫的一端;

所述硝酸纤维素膜设有检测区T区和质控区C区;所述检测区T区包括T1线、T2线、T3线和T4线;所述质控区C区包括C1线和C2线;

所述T1线上喷涂有T1线溶液;所述T1线溶液包括miR-16捕获探针;所述miR-16捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述miR-16捕获探针的3’端经生物素标记;

所述T2线上喷涂有T2线溶液;所述T2线溶液包括miR-191捕获探针;所述miR-191捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述miR-191捕获探针的3’端经生物素标记;

所述T3线喷涂有T3线溶液;所述T3线溶液包括鼠抗CA153蛋白单克隆抗体;

所述T4线喷涂有T4线溶液;所述T4线溶液包括鼠抗CA125蛋白单克隆抗体;

所述C1线喷涂有C1线溶液;所述C1线溶液包括miR-16控制探针和miR-191控制探针;所述miR-16控制探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述miR-191控制探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;所述miR-16控制探针和miR-191控制探针的3’端分别经生物素标记;

所述C2线喷涂有C2线溶液;所述C2线溶液包括二抗;

所述结合垫吸附有胶体金-检测探针偶联物;所述胶体金-检测探针偶联物包括胶体金-miR-16检测探针偶联物、胶体金-miR-191检测探针偶联物、胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物和胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物;所述miR-16检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;所述miR-191检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示;所述miR-16检测探针和miR-191检测探针的3’端分别经巯基修饰。

2.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,所述T3线溶液中鼠抗CA153蛋白单克隆抗体的浓度为0.8~1.2mg/mL;所述T4线溶液中鼠抗CA125蛋白单克隆抗体的浓度为0.8~1.2mg/mL。

3.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,所述搭接的重叠部分的长度分别为2~3mm。

4.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,从结合垫到吸收垫方向行依次分布有T1线、T3线和C1线,第二行依次分布有T2线、T4线和C2线;每个相邻位点间距为4~6mm。

5.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物或胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物的制备方法,包括以下步骤:将纳米金溶液、HPV蛋白溶液和牛血清蛋白溶液混合,进行偶联,得到胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物或胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物;所述HPV蛋白为CA153蛋白或CA125蛋白。

6.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,所述胶体金-miR-16互补序列探针偶联物或胶体金-miR-191互补序列探针偶联物的制备方法,包括以下步骤:将纳米金溶液、dATP溶液、十二烷基硫酸钠溶液、NaCl水溶液和miRNA互补序列探针混合,进行偶联,得到胶体金-miR-16互补序列探针偶联物或胶体金-miR-191互补序列探针偶联物;所述miRNA互补序列探针为miR-16互补序列探针或miR-191互补序列探针偶联物。

7.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,所述T1线溶液或T2线溶液的制备方法包括以下步骤:将生物素标记的miR-16部分互补序列或miR-191部分互补序列与链霉亲和素溶液混合,进行培养,得到T1线溶液或T2线溶液。

8.本发明还提供了权利要求1~7任意一项所述乳腺癌检测胶体金侧流层析试纸条的制备方法,包括以下步骤:

1)将硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上,依次固定结合垫、样品垫和吸收垫;

2)在结合垫吸附胶体金-检测探针偶联物,在硝酸纤维素膜的T1线、T2线、T3线、T4线、C1线和C2线处分别喷涂T1线溶液、T2线溶液、T3线溶液、T4线溶液、C1线溶液和C2线溶液,得到乳腺癌检测胶体金侧流层析试纸条。

9.一种同时检测乳腺癌和宫颈癌的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,以权利要求1所述乳腺癌检测胶体金侧向层析试纸条为基础,所述检测区T区还包括T5线、T6线、T7线和T8线;

所述T5线上喷涂有T5线溶液;所述T5线溶液包括miR-21捕获探针;所述miR-21捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示;所述miR-21捕获探针的3’端经生物素标记;

所述T6线上喷涂有T6线溶液;所述T6线溶液包括miR-196a捕获探针;所述miR-196a捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示;所述miR-196a捕获探针的3’端经生物素标记;

所述T7线喷涂有T7线溶液;所述T7线溶液包括鼠抗HPV E6蛋白单克隆抗体;

所述T8线喷涂有T8线溶液;所述T8线溶液包括鼠抗HPV E7蛋白单克隆抗体;

所述胶体金-检测探针偶联物还包括胶体金-miR-21检测探针偶联物、胶体金-miR-

196a检测探针偶联物、胶体金-HPV E6蛋白-牛血清蛋白偶联物和胶体金-HPV E7蛋白-牛血清蛋白偶联物;所述miR-21检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示;所述miR-196a检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示;所述miR-21检测探针和miR-196a检测探针的5’端分别经巯基修饰。

10.根据权利要求9所述的同时检测乳腺癌和宫颈癌的胶体金侧向层析试纸条,其特征在于,以硝酸纤维素长边为行,所述T1线、T2线、T3线、T4线、T5线、T6线、T7线、T8线、C1线和C2线呈2行3列分布,从结合垫到吸收垫方向行依次分布有T1线、T2线、T3线、T4线和C1线,第二行依次分布有T5线、T6线、T7线、T8线和C2线。