1.胺转氨酶AcATA突变体,其特征在于,所述胺转氨酶AcATA突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第122位进行单突变获得;
其中,第122位的甲硫氨酸突变成组氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸。
2.一种如权利要求1所述的胺转氨酶AcATA突变体的编码基因。
3.一种包含权利要求2所述编码基因的重组载体。
4.一种包含权利要求2所述编码基因的基因工程菌。
5.如权利要求1所述的胺转氨酶AcATA突变体在生物催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮中的应用。
6.如权利要求4所述的基因工程菌在催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮中的应用。
7.一种生物催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮的方法,其特征在于,包括:以1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮为底物,权利要求1所述胺转氨酶AcATA突变体或权利要求4所述基因工程菌为生物催化剂,异丙胺为氨基供体,磷酸吡哆醛为辅酶,在缓冲溶液中进行生物催化合成反应,得到(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-
1-丁酮。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,反应体系中,反应温度为45-50℃,搅拌速度为500-600rpm,反应时间为12-36h;所述底物与氨基供体的摩尔比为1:7-12;所述底物与生物催化剂的摩尔比为1:1-3。
9.如权利要求7所述的方法,其特征在于,以反应体系中缓冲液的总体积计,所述底物的终浓度为2-100g/L,所述氨基供体的终浓度为25-95g/L,所述辅酶的终浓度为0.3-0.5g/L,所述生物催化剂的添加量为10-50g/L。
10.如权利要求7所述的方法,其特征在于,反应体系中,还包括底物的助溶剂;所述助溶剂为二甲基亚砜或甲基叔丁基醚;
在温度45-50℃、搅拌速度500-600r/min的条件下进行生物催化反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮;
反应体系中,所述基因工程菌的湿菌体的终浓度为25g/L,底物终浓度为25g/L或10g/L,二甲基亚砜或甲基叔丁基醚的体积终浓度为20%,磷酸吡哆醛0.5g/L,异丙胺80g/L。