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专利号: 2020102819732
申请人: 杭州园泰生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-06-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.富含DHA藻油的生产、提取以及纯化工艺,其特征在于,所述工艺包括如下步骤:步骤1)种子培养:将斜面保藏的隐甲藻活化,然后接入装有500mL摇瓶种子培养基的2L的培养瓶中进行摇瓶种子培养,以120rpm转速、25℃培养48h,然后按照3‑5%的接种量接种到种子罐培养基中进行培养,培养条件为:180rpm、25℃、通气量0.5‑1vvm,培养48‑72h,得到隐甲藻种子液;步骤2)发酵:将隐甲藻种子液按照3‑5%的接种量接种到含有发酵培养液的反应池中,25℃培养,通气速率为1‑2vvm;培养至72h时,往发酵培养液中添加花生四烯酸和没食子酸丙酯,继续培养48‑72h;整个发酵培养过程中通过添加流加葡萄糖控制葡萄糖浓度不低于1g/L,通过流加氨水控制pH在6.5‑7.5;步骤3)提取粗油脂:收集藻液,  4000r/min离心10min,沉淀用蒸馏水清洗3次,  50℃真空干燥,将藻细胞粉碎,然后添加到氯仿甲醇混合溶液中,添加量为1g粉末:3ml氯仿甲醇混合溶液,微波提取,微波功率为200W,提取时间为60min,提取温度为50℃,然后进行超声提取,提取温度为60℃,超声功率为200W,提取时间为60min,再进行离心,收集氯仿相,置于氮气中吹干,并且真空干燥,得到粗油脂;步骤4)纯化:将粗油脂经过阳离子交换树脂进行离子交换,然后加入1‑2wt%的活性炭,在氮气保护下,100‑200rpm搅拌脱色30‑60min,将脱色后的油脂通过500‑1000目的过滤膜进行过滤,收集滤过液,即得;所述步骤2)中,花生四烯酸的添加量为40‑80mg/L,没食子酸丙酯的添加量为10‑20mg/L。2.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于,所述摇瓶种子培养基和种子罐培养基的组分均为:葡萄糖10g/L,氯化钠5g/L,硫酸铵2g/L,氯化镁0.1g/L,磷酸二氢钾0.1g/L。3.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于,所述发酵培养液的组分为:葡萄糖20g/L,糖蜜20g/L,氯化钠8g/L,硫酸铵5g/L,硝酸钾2g/L,氯化镁0.2g/L,磷酸二氢钾0.2g/L,硅酸钠0.1g/L,吲哚乙酸10mg/L,赤霉素10mg/L。4.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于,所述氯仿甲醇混合溶液由氯仿和甲醇按照体积比为2:1混合制得。