欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2020103196599
申请人: 河南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种siRNA纳米胶囊,其特征在于,包括siRNA以及包封所述siRNA的壳,所述siRNA与所述壳通过静电结合连接;

所述壳主要由单体A和单体B聚合得到,在所述壳外还连接有靶向配体;

所述单体A能够与所述siRNA通过静电结合,包括一端带有双键的分子;

所述单体B包括用于增加肿瘤微环境敏感性的分子。

2.根据权利要求1所述的siRNA纳米胶囊,其特征在于,所述单体A包括胍基丙烯酸酯、丙烯酸精胺或N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺;

优选地,所述用于增加肿瘤微环境敏感性的分子包括增加还原敏感性的分子、增加酸敏感性的分子或增加ROS响应的分子,优选增加还原敏感性的分子;

优选地,所述增加还原敏感性的分子包括含有二硫键的分子,更优选包括双胱胺丙烯酰胺;

优选地,所述单体B还包括用于连接靶向配体的分子;

优选地,所述用于连接靶向配体的分子一端与用于增加肿瘤微环境敏感性的分子相连,另一端连接有靶向配体,优选包括丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯、丙烯酸酯聚乙二醇马来酰亚胺或丙烯酸酯透明质酸琥珀酰甲酯;

优选地,所述靶向配体包括Angiopep-2、RGD肽、apolipoprotein E或transferrin,优选为Angiopep-2。

3.权利要求1或2所述的siRNA纳米胶囊在制备治疗肿瘤的药物中的应用;

优选地,所述肿瘤为胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌或宫颈癌。

4.权利要求1或2所述的siRNA纳米胶囊的制备方法,其特征在于,包括使与siRNA静电结合的单体A与单体B发生聚合反应,得到壳,再在所述壳上连接靶向配体,得到所述siRNA纳米胶囊;

所述单体A包括一端带有双键的分子;

所述单体B包括用于增加肿瘤微环境敏感性的分子以及用于连接靶向配体的分子。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,将siRNA与单体A混合后,再加入单体B,在引发剂和任选地催化剂的作用下使siRNA表面的自由基发生聚合反应,形成包封所述siRNA的壳;

优选地,所述单体A包括胍基丙烯酸酯、丙烯酸精胺或N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺;

优选地,所述用于增加肿瘤微环境敏感性的分子包括增加还原敏感性的分子、增加酸敏感性的分子或增加ROS响应的分子,优选增加还原敏感性的分子;

优选地,所述增加还原敏感性的分子包括含有二硫键的分子,更优选包括双胱胺丙烯酰胺;

优选地,所述单体B还包括用于连接靶向配体的分子;

优选地,所述用于连接靶向配体的分子一端与用于增加肿瘤微环境敏感性的分子相连,另一端连接有靶向配体,优选包括丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯、丙烯酸酯聚乙二醇马来酰亚胺或丙烯酸酯透明质酸琥珀酰甲酯;

优选地,所述靶向配体包括Angiopep-2、RGD肽、apolipoprotein E或transferrin,优选为Angiopep-2;

优选地,所述引发剂包括过硫酸铵,优选为0.05%-0.2%w/v的过硫酸铵溶液,更优选为0.1%w/v的过硫酸铵溶液;

优选地,所述催化剂包括N,N,N',N'-四甲基乙二胺,优选为0.2%-0.8%w/v的N,N,N',N'-四甲基乙二胺溶液,更优选为0.5%w/v的N,N,N',N'-四甲基乙二胺溶液。

6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,将siRNA与胍基丙烯酸酯混合后,再加入双胱胺丙烯酰胺和丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯,在过硫酸铵和N,N,N',N'-四甲基乙二胺的作用下使siRNA表面的自由基发生聚合反应,形成包封所述siRNA的壳;

优选地,混合后siRNA与胍基丙烯酸酯的摩尔比为1:200-250,优选为1:220;

优选地,胍基丙烯酸酯、双胱胺丙烯酰胺与丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯的摩尔比为3-8:3-8:1,优选为5:5:1。

7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,通过搅拌的方式将siRNA与胍基丙烯酸酯混合;

优选地,所述搅拌包括如下条件中的至少一个:

时间为10-20分钟,温度为20-25℃;

优选搅拌的时间为15分钟,温度为20-25℃。

8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述聚合反应包括如下条件中的至少一个:在无氧环境下进行,温度为0-5℃,时间为25-35分钟;

优选聚合反应在无氧环境下进行,温度为0℃,时间为30分钟。

9.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,在形成壳后加入靶向配体进行连接反应,得到所述siRNA纳米胶囊;

优选地,所述靶向配体包括Angiopep-2;

优选地,所述Angiopep-2与丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯的摩尔比为2-5:1,优选为

3:1;

优选地,所述连接反应包括如下条件中的至少一个:

温度为20-25℃,时间为1.8-2.2小时;

优选连接反应的温度为20-25℃,时间为2小时。

10.根据权利要求4-9任一项所述的制备方法,其特征在于,向500μL siRNA水溶液中加入10μL胍基丙烯酸酯,在20-25℃下搅拌15分钟,得到siRNA与胍基丙烯酸酯的摩尔比为1:

220的混合液;向所述混合液中加入20μL双胱胺丙烯酰胺和90μL丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯,使胍基丙烯酸酯、双胱胺丙烯酰胺与丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯的摩尔比为

5:5:1,然后加入20μL的0.1%过硫酸铵溶液和10μL的0.5%N,N,N',N'-四甲基乙二胺溶液,在0℃的无氧环境下进行30分钟聚合反应后,加入45μg Angiopep-2并在20-25℃下进行2小时连接反应,得到siRNA纳米胶囊;所述Angiopep-2与丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯的摩尔比为3:1;

优选地,在连接反应后还包括除杂的步骤,然后得到siRNA纳米胶囊;

优选地,通过截留分子量10kDa进行除杂。